[发明专利]一种菲律宾蛤仔寡肽的制备方法及其在抗前列腺癌中的应用

权利要求书

1.一种菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

①将菲律宾蛤仔洗净，取肉后加超纯水搅拌，然后去杂质匀浆，制得匀浆样品；

②取适量的所述匀浆样品，加入适量体积的超纯水，此时原料与超纯水的比值为1:1～1:4，加入蛋白酶在水浴箱中进行酶解反应，其中加酶量为300ug～1500ug,酶解反应的pH值为8～9，酶解时间为4h～12h，酶解温度为40℃～60℃；

③酶解反应结束后灭活、离心、取上清液备用；

④将所述上清液加入超滤膜中进行超滤，收集分子量小于3KDa的酶解物质进行冷冻干燥备用；

⑤利用DEAE SepharoseFF阴离子交换，采用磷酸缓冲液和NaCl溶液对所得酶解液进行阶段洗脱，在280nm波长处收集最高肽峰冷冻干燥后贮存备用；

⑥将DEAE SepharoseFF阴离子交换收集的最高肽峰利用反相高效液相色谱法进行进一步纯化，在220nm波长处出现唯一峰，收集该峰，冷冻干燥制得所述菲律宾蛤仔寡肽。

2.根据权利要求1所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于：所述步骤②中原料与超纯水的比值为1:2。

3.根据权利要求1所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于：所述步骤②中所述蛋白酶为胰蛋白酶，所述加酶量为1200ug，酶解pH值为8.0，酶解时间为8h，酶解温度为50℃。

4.根据权利要求1所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于：所述步骤③中为沸水浴中灭活15min，4℃下10000r/min离心15min。

5.根据权利要求1所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于：所述步骤⑤中NaCl溶液的浓度为0.1mol/L、0.3mol/L、0.5mol/L三种。

6.根据权利要求1所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法，其特征在于：所述步骤⑥中色谱柱为C₁₈反相柱，填料为ODS，流动相为乙腈与水，且乙腈与水的比例为15：85，流速为0.8ml.min^-1，上样体积为20ul，检测波长为220nm，洗脱条件为15%乙腈，20min。

7.一种由权利要求1～7任一权利要求所述的菲律宾蛤仔寡肽的制备方法所得的菲律宾蛤仔寡肽，其特征在于：所述菲律宾蛤仔寡肽的氨基酸序列为Asp-Trp-Pro-His。

8.一种如权利要求7所述菲律宾蛤仔寡肽的应用，其特征在于：所述菲律宾蛤仔寡肽在抗前列腺癌中的应用。