[发明专利]一种游动放线菌菌株及其在制备非达霉素中的应用

权利要求书

1.一种游动放线菌菌株，其特征在于所述菌株保藏名称是游动放线菌（Actinoplanes sp.）N12W0304，保藏单位中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏日期2012年12月26日，保藏编号为CGMCC No.7043。

2.一种游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于它包括以下步骤：

a、制备游动放线菌N12W0304种子液：

将菌株N12W0304的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，27-34 ℃、转速180-220 rpm培养48-72 h获得种子液；

其中所说的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉20.0-40.0克、葡萄糖0.5-5.0克，蛋白胨1.0-10.0克、牛肉膏1.0-10.0克、酵母浸粉1.0-10.0克，加水定容至1000 ml；pH值7.0-7.2，121 ℃灭菌30 min；

b、制备游动放线菌的发酵液：

将上述种子液以体积百分比5-15 %的接种量接种于发酵培养基，在摇瓶或发酵罐中发酵，发酵温度28-32 ℃、发酵时间96-168 h，得发酵液；

其中所说的发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖30.0-50.0克、脱脂大豆粉10.0-30.0克、牛肉膏1.0-10.0克、K₂HPO₄ 0.1-1.0克、FeSO₄·7H₂O 0.1-1.0克、MgSO₄·7H₂O 0.1-1.0克、NaCl 1.0-5.0克、豆油1.0-2.0克，加水定容至1000 ml，pH值7.0-7.5，121 ℃灭菌30 min；

c、将上述发酵液进行离心10-20min，弃去上清液，获得菌丝体；

d、用有机溶剂对菌丝体浸提2-4次，每次2-4 h，合并浸提液，减压浓缩，除去有机溶剂，得到浓缩液；

e、浓缩液加入体积比浓度为10-25 %的有机溶剂水溶液，搅拌5-25 min，过滤，获得滤液；

f、上述滤液导入大孔树脂，用有机溶剂进行梯度洗脱，收集含非达霉素的流出液，减压浓缩，除去有机溶剂，剩余物用乙酸乙酯溶液萃取2-4次，合并萃取液，减压蒸干，获得非达霉素粗品；

以上所述的有机溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、丙酮中的任意一种。

3.根据权利要求1所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于获得非达霉素粗品后将非达霉素粗品溶于有机溶剂中，用0.45 μm滤膜过滤后，高效液相色谱分离；色谱条件：制备柱为Daisogel-C18 30×250 mm 10 μm；流动相为体积比57 %的乙腈水溶液、含0.05 %三氟乙酸；流速40 ml/min； UV254 nm检测，接收符合非达霉素色谱峰的流出液，合并，减压浓缩蒸干，得非达霉素精品。

4.根据权利要求2所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于所述的摇瓶发酵，其转速为180-220 rpm。

5.根据权利要求2所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于所述的发酵罐发酵，其罐压为0.05±0.01 Mpa、通气量为10-30 L/min，搅拌速度为400-500 rpm。

6.根据权利要求2所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于所述的步骤d所述的减压浓缩在30-50 ℃进行。

7.根据权利要求2所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于：步骤f所述的大孔树脂HP-20、XAD-16、XAD-1600、HZ816、D312、D101、AB-8中的一种。

8.根据权利要求2所述的游动放线菌在制备非达霉素中的应用，其特征在于所述有机溶剂梯度洗脱，其梯度洗脱时有机溶剂的质量比浓度依次为20 %、40 %、60 %。