[发明专利]一种游动放线菌菌株及其在制备非达霉素中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微生物及其在制药领域中的应用。具体地说是游动放线菌及其在制备非达霉素中的应用。 

背景技术

非达霉素是由放线菌发酵产生的一类18元环大环内酯类抗生素，其主要是通过抑制细菌的RNA聚合酶而迅速产生抗难治梭状芽孢杆菌感染（CDI）作用。其治疗CDI优于现有药物。目前发现的非达霉素产生菌主要为指孢囊菌属（Dactylosporangium sp.）橙指孢囊菌哈姆登亚种（D.aurantiacum subsp.hamdenensis）NRRL18085菌株和游动放线菌属（Actinoplanes sp.）德干高原游动放线菌（A.deccanensis）ATCC21983菌株。目前有关非达霉素的研究主要涉及非达霉素的化学结构、剂型、晶型、用途、组合物，如CN200580048715.3、WO2009070779A1、USP 7906489B2、USP 7378508B2、USP 7863249B2等专利文献都是针对上述课题所作的研究。WO2007048059A2是针对非达霉素发酵菌株和发酵方法的为数不多的专利文献，但其发酵单位仅为50mg/L左右。由此可见，寻找非达霉素高效菌株、提高非达霉素发酵产量已成为人们亟待解决的重要课题之一。 

发明内容

本发明的目的就是提供一种非达霉素高效菌株，同时提供一种该菌株在制备非达霉素中的应用方法，以期有效提高非达霉素的发酵产量。 

本发明所提供的非达霉素高效菌株为游动放线菌菌株，其保藏名称为游动放线菌（Actinoplanes sp.）N12W0304，保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏日期2012年12月26日，保藏编号为CGMCC No.7043，保藏单位地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。 

本发明所提供的游动放线菌株（Actinoplanes sp.）N12W0304，其在ISP2、ISP4、ISP5、ISP6、ISP7等不同培养基平板上菌落呈现肉色至浅粉色不同颜色，基丝生长良好、不断裂，无气丝，基丝上生有不规则状孢囊。 

本发明所提供的非达霉素高效菌株分离自仙鹤草叶样品的野生菌株，仙鹤草样品采集自云南（北纬23°22′39.648，东经104°47′17.0808，海拔1498.7432m），样品采集后保存于4℃， 并尽快分离。仙鹤草样品经自来水多次冲洗除去表面泥土后，在无菌条件下采用次氯酸钠、75%乙醇等进行表面消毒，表面消毒后的仙鹤草样品经无菌滤纸充分吸干水分，在无菌条件下粉碎后撒在分离培养基平板上，于28℃培养3-6周，待放线菌菌落长出后，挑取至高氏一号培养基（阮继生,刘志恒,梁丽糯,等.放线菌研究及应用[M].北京:科学出版社,1990:2-18），纯化后培养于ISP2斜面培养基。 

采用本发明所述应用方法，其非达霉素的发酵单位可达到1200mg/L以上。故其可在制备非达霉素中得到应用。 

本发明所提供的游动放线菌株在制备非达霉素中的应用方法，包括以下步骤： 

a、制备游动放线菌N12W0304种子液： 

将菌株N12W0304的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，27-34℃、转速180-220rpm培养48-72h获得种子液； 

其中所说的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉20.0-40.0克、葡萄糖0.5-5.0克，蛋白胨1.0-10.0克、牛肉膏1.0-10.0克、酵母浸粉1.0-10.0克，加水定容至1000ml；pH值7.0-7.2，121℃灭菌30min； 

b、制备游动放线菌的发酵液： 

将上述种子液以体积百分比5-15%的接种量接种于发酵培养基，在摇瓶或发酵罐中发酵，发酵温度28-32℃、发酵时间96-168h；，得发酵液； 

其中所说的发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖30.0-50.0克、脱脂大豆粉10.0-30.0克、牛肉膏1.0-10.0克、K₂HPO₄0.1-1.0克、FeSO₄·7H₂O0.1-1.0克、MgSO₄·7H₂O0.1-1.0克、NaCl1.0-5.0克、豆油1.0-2.0克，加水定容至1000ml，pH值7.0-7.5，121℃灭菌30min； 

c、将上述发酵液进行离心10-20min，弃去上清液，获得菌丝体；