[发明专利]精氨酸脱亚氨基酶基因工程菌的构建及其用途无效
| 申请号： | 201310210386.4 | 申请日： | 2013-05-31 |
| 公开（公告）号： | CN104212753A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 马承国;程占冰;王开成;李金龙 | 申请（专利权）人： | 上海凯圣生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/55;C12N15/70;C12P13/10;C12R1/19 |
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| 地址： | 201803 上海市嘉*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 精氨酸 氨基 基因工程 构建 及其 用途 | ||
1. 一种含有精氨酸脱亚氨基酶的大肠杆菌基因工程菌的构建方法及其用途，其特征在于，包括将精氨酸脱亚氨基酶基因连接，构建重组pET28a质粒，转化大肠杆菌BL21感受态细胞，以及利用重组酶或大肠杆菌基因工程菌用于生产L-瓜氨酸的方法。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述大肠杆菌基因工程菌为大肠杆菌（Escherichia coli）BL21 CGMCC No.7491和大肠杆菌（Escherichia coli）BL21 CGMCC No.7492。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述精氨酸脱亚氨基酶基因含有核苷酸序列SEQ ID：No. 1或SEQ ID：No.3，含有氨基酸序列SEQ ID：No. 2或SEQ ID：No.4。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述精氨酸脱亚氨基酶基因是通过扩增获得，以含有精氨酸脱亚氨基酶基因序列的环境微生物群落基因组为模板，在其上游设计Nde I酶切位点，在其下游设计Hind III酶切位点，其引物为：
ADIPF：5’- GGAATTCCATATGTCCGCTGAAAAACAGAAGTACG-3’
ADIPR: 5’- CCCAAGCTTAGTAATCGATCGGGTCAC-3’ 。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述构建重组pET28a质粒中，以所述扩增的精氨酸脱亚氨基酶基因经加A反应后用T4连接酶连接，导入大肠杆菌BL21感受态细胞。
6.根据根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述诱导表达：培养基因工程菌细胞至对数期，加入诱导剂诱导3-8小时，培养温度25-37℃。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生产L-瓜氨酸的方法，湿菌体用量1%，精氨酸底物浓度在10%左右，精氨酸转化率99%。
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