[发明专利]一种检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法

权利要求书

1.一种检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤，（1）分别制备不同浓度的RBL-2H3细胞悬液和绿原酸类成分溶液；（2）利用实时细胞分析仪对不同细胞浓度的RBL-2H3悬液中的细胞生长指数进行监测，确定实时细胞分析仪检测绿原酸类成分导致类过敏反应时使用的RBL-2H3细胞悬液的最佳细胞浓度及添加绿原酸类成分溶液的最佳时间点；（3）利用实时细胞分析仪检测添加绿原酸类成分溶液前后的RBL-2H3细胞生长指数值，根据添加绿原酸类成分溶液后RBL-2H3细胞生长指数值的变化情况，判断绿原酸类成分是否会导致类过敏反应。

2. 根据权利要求1所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述实时细胞分析仪为DP型实时细胞分析仪。

3.根据权利要求1所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述绿原酸类成分为绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、隐绿原酸或新绿原酸。

4.根据权利要求1所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述不同浓度绿原酸类成分溶液的配制方法是，将绿原酸类成分用RBL-2H3细胞培养液超声溶解10～20min，再用孔径为0.2μm的微孔滤膜过滤除菌得到绿原酸类成分母液，再用RBL-2H3细胞培养液将绿原酸类成分母液稀释，得到不同浓度的绿原酸类成分溶液。

5.根据权利要求4所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述RBL-2H3细胞培养液为质量浓度15%胎牛血清的DMEM培养液或质量浓度15%胎牛血清的MEM培养液。

6.根据权利要求1所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述步骤（2）的具体操作步骤是，①在实时细胞分析仪的检测板每个板孔中分别加入100μl的RBL-2H3细胞培养液，再将检测板置入培养箱中的细胞分析仪上，培养箱中CO2的体积浓度为5%，温度为37℃；②设置信号采集频率为1次/min,测量实时细胞分析仪未有RBL-2H3细胞时培养液的细胞生长指数，将此时的细胞生长指数定位基准；③分别将100μl不同细胞浓度的RBL-2H3细胞悬液加入每个检测板板孔中的RBL-2H3细胞培养液中，设定信号采集频率为1次/15min,测量实时细胞分析仪有RBL-2H3细胞时培养液中的细胞生长指数；④分析比较不同浓度RBL-2H3细胞悬液的细胞生长指数曲线，选择RBL-2H3细胞加入到RBL-2H3细胞培养液后最快经过潜伏期进入对数生长期，且当实时细胞分析仪检测到45h时RBL-2H3细胞仍能处于对数生长期对应的RBL-2H3细胞悬液浓度，即为实时细胞分析仪检测绿原酸类成分导致类过敏反应时使用的RBL-2H3细胞悬液的最佳细胞浓度；⑤分析④步确定的最佳细胞浓度的RBL-2H3细胞所对应的细胞生长指数曲线，当细胞生长指数为1的时间点，即为添加绿原酸类成分溶液的最佳时间点。

7.根据权利要求6所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，步骤④分析比较不同浓度RBL-2H3细胞悬液的细胞生长指数曲线时，不同浓度RBL-2H3细胞细胞悬液是RBL-2H3细胞浓度为2×105、4×105、5×105、8×105的细胞悬液，上述RBL-2H3浓度的单位为个/ml。

8.根据权利要求6或7所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，步骤④确定的用于实时细胞分析仪检测绿原酸类成分导致类过敏反应的RBL-2H3细胞悬液的最佳细胞浓度为2×105个/ml。

9.根据权利要求1所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，其特征在于，所述步骤（3）的具体操作步骤是，①在实时细胞分析仪的检测板每个板孔中分别加入100μl的RBL-2H3细胞培养液，再将检测板置入培养箱中的细胞分析仪上，培养箱中CO2的体积浓度为5%，温度为37℃，设置信号采集频率为1次/min,实时细胞分析仪检测未有RBL-2H3细胞时培养液的细胞生长指数，将此时的细胞生长指数定位基准；②将步骤（2）确定的最佳细胞浓度的RBL-2H3细胞悬液100μl加入到每个检测板板孔的RBL-2H3细胞培养液中，设定信号采集频率为1次/15min，实时细胞分析仪对培养液中RBL-2H3的细胞生长指数进行监测；③待细胞生长到步骤（2）确定的最佳添加绿原酸类成分溶液的时间点时，吸弃检测板板孔中的RBL-2H3细胞培养液，再向每个板孔中加入200μl不同浓度的绿原酸类成分溶液,另设置2个板孔，添加200μlRBL-2H3细胞培养液，即为空白对照板孔；④设定信号采集频率为1次/min，实时细胞分析仪检测绿原酸类成分溶液中RBL-2H3细胞生长指数。