[发明专利]一种检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法

说明书

技术领域

本发明属于药物检测的技术领域，具体是一种检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法。

背景技术

绿原酸是植物体在有氧呼吸过程中经莽草酸途径产生的一种苯丙素类化合物，是一种重要的生物活性物质，具有抗菌、抗病毒、兴奋中枢神经系统和清除自由基等作用。含绿原酸类成分的中药注射剂如双黄连注射液、清开灵注射液等约占已上市中药注射剂品种数量的22％，其临床疗效确切，而不良反应时有发生（主要为过敏反应，其中类过敏反应约占70%-80%）。绿原酸类成分作为一种主要的药效成分，同时又是一种可疑的致敏物质，但至今该类成分是否为过敏原尚未有定论，其客观真实性亟待阐明！目前，类过敏反应检查缺乏足够可靠的动物模型，也就难以建立相应的评价方法。新近开展的小鼠耳廓蓝染试验法、降压检查法在物种差异、反应链末端化、重现性等方面还有待解决；过敏介质或扫描/透射电镜检测，因半衰期短或需化学固定、显色处理，操作繁琐、且细胞已死亡导致系列生物信息缺失；仅能观察某一时相状态，缺乏连续动态监测。

发明内容

为解决上述技术缺陷，本发明公开了一种检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，一般检测溶液或药液的类过敏反应时，本领域都是采用RBL-2H3作为检测对象，本发明的方法可实时反映RBL-2H3在添加含绿原酸类成分前后经历的生长、伸展、形态变化、死亡生理状态，并且得出绿原酸类成份导致类过敏反应的溶液浓度范围，从而在使用含绿原酸类成份药品的治疗中，可避免药液产生过敏反应对人体造成的不良影响，提高治疗效率，减轻患者的痛苦。 

实现上述目的技术方案是，本发明公开的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法，包括以下步骤，（1）分别制备不同浓度的RBL-2H3细胞悬液和绿原酸类成分溶液；（2）利用实时细胞分析仪对不同细胞浓度的RBL-2H3悬液中的细胞生长指数进行监测，确定实时细胞分析仪检测绿原酸类成分导致类过敏反应时使用的RBL-2H3细胞悬液的最佳细胞浓度及添加绿原酸类成分溶液的最佳时间点；（3）利用实时细胞分析仪检测添加绿原酸类成分溶液前后的RBL-2H3细胞生长指数值，根据添加绿原酸类成分溶液后RBL-2H3细胞生长指数值的变化情况，判断绿原酸类成分是否会导致类过敏反应。

所述的检测绿原酸类成分导致类过敏反应的方法中，采用的实时细胞分析仪为DP型实时细胞分析仪。DP型号是罗氏公司推出的最新型号的实时细胞分析仪，新的DP型实时细胞分析仪利用无标记、非侵入性电极阻抗测量得出细胞生长指数值，提供了实时的细胞分析，并对平行进行短期和长期的分析研究者来说具有高度的灵活性，DP型的实时细胞分析仪的检测板共3块16个孔板，可由三个不同的用户同时操作，由于其体积小，检测板可放入标准的培养箱中，轻松实现最优的培养的条件。

所述的绿原酸类成分为绿原酸、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C、隐绿原酸或新绿原酸。绿原酸类成分是对绿原酸及其异构体、分解产物、提取中可能产生的结构变异等的统称。

所述不同浓度绿原酸类成分溶液的配制方法是，将绿原酸类成分用RBL-2H3细胞培养液溶解，再用孔径为0.2μm的微孔滤膜过滤除菌得到绿原酸类成分母液，再用RBL-2H3细胞培养液将绿原酸类成分母液稀释，得到不同浓度的绿原酸类成分溶液。利用RBL-2H3细胞培养液作为绿原酸类成分溶液的溶剂，防止其它化学试剂破坏细胞的黏性、弹性，避免了细胞破裂、聚堆不好观察现象的发生。

所述RBL-2H3细胞培养液为质量浓度15%胎牛血清的DMEM培养液或质量浓度15%胎牛血清的MEM培养液。