[发明专利]一种借助RT-LAMP检测人感染H7N9亚型禽流感病毒的引物及应用

权利要求书

1.一种借助RT-LAMP检测人感染H7N9亚型禽流感病毒的引物，包括简并引物和环引物，所述简并引物和环引物是依据现有核酸数据库中人感染H7N9亚型禽流感病毒的H7基因节段序列和N9基因节段序列分别进行同源性比对，根据保守序列，针对各基因设计而得，所述H7基因简并引物的序列为：

H7-F3TGTCTGTTATCCTGGGAAAT

H7-B3AGCATTATCTGTGTTTGACAG

H7-FIP GTATGTGAATCCCATTGCTTCCTTGGTGAATGAAGAAGCTCTGAGG

H7-BIP GGAATAAGAACTAATGGARCAACCAAGCCATTTCATTTCTGCATAG；所述H7基因环引物的序列为：

H7-LF CCGCCTGATTCTCTGAGWATTT

H7-LB GCATGTAGGAGATCAGGATCTTCA；

所述N9基因简并引物的序列为：

N9-F3CGAGGTCTGGATACGAGA

N9-B3TTATCYTCCTTGGGTCTTCC

N9-FIP AGCGTTTARTACAATTGTCTGACCTTTAAAAGTGCCAAATGCATTGA

N9-BIP CTGGAGTGGTTACAGTGGATCTYTCCACATAAAAACACGCTC；

所述N9基因环引物的序列为：

N9-LF TGAATGGGCTTTGATCTATCATCTG

N9-LB TGGACTATTGGGCTGARGGGGAC。

2.根据权利要求1所述借助RT-LAMP检测人感染H7N9亚型禽流感病毒的引物的应用，包括以下步骤：

步骤一：针对人感染H7N9亚型禽流感病毒的H7基因节段和N9基因节段序列，设计并合成包含T7启动子的引物,对扩增的目的基因片段进行体外转录，转录产物纯化和定量后，将其稀释为10⁶-10⁰拷贝/μl，即得人感染H7N9亚型禽流感病毒的H7基因节段和N9基因节段的标准RNA模板，作为对照；

步骤二：将人感染H7N9亚型禽流感病毒的HA和NA基因分别进行H7亚型RT-LAMP反应和N9亚型RT-LAMP反应，在所述RT-LAMP反应体系中加入目测荧光染料，于反应结束后依据目测结果进行结果判读。

3.根据权利要求2所述借助RT-LAMP检测人感染H7N9亚型禽流感病毒的引物的应用，其特征在于：所述步骤一中，

H7基因T7启动子引物的序列为：

HA:CCTGGTATTCGCTCTGATTGC

HA-T7:ACTCGTTAATACGACTCACTATAGGGAGGCACCGCATGTTTCCATTCT；N9基因T7启动子引物的序列为：

NA:TCTATGCACTTCAGCCACTG

NA-T7:ACTCGTTAATACGACTCACTATAGGGAGCCATCAGGCCAGTTCCATTG。

4.根据权利要求2所述借助RT-LAMP检测人感染H7N9亚型禽流感病毒的引物的应用，其特征在于：所述H7亚型和N9亚型的RT-LAMP反应条件均为60～65℃，30～60min。