[发明专利]一种鉴别金银花和山银花的PCR-RFLP方法无效
| 申请号： | 201310213342.7 | 申请日： | 2013-06-03 |
| 公开（公告）号： | CN103290127A | 公开（公告）日： | 2013-09-11 |
| 发明（设计）人： | 朱云国;王庆霞;程舟;杨晓伶;李珊 | 申请（专利权）人： | 同济大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海正旦专利代理有限公司 31200 | 代理人： | 张磊 |
| 地址： | 200092 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 金银花 山银花 pcr rflp 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种鉴别金银花和山银花的PCR-RFLP方法，其特征在于具体步骤如下：
(1)从金银花及山银花药材样品中提取DNA，利用改良CTAB法，用无离子水将供试样品的DNA浓度调节至0.1~0.3μg/μl；
(2)通过一对引物，利用聚合酶链式反应（PCR），扩增步骤(1)得到的一段DNA，其中：用于PCR扩增的一对引物的DNA序列为：
Y1：5’-AGAAGTCGTAACAAGGTTTCCGTAGG-3’
Y2：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’
(3)对步骤(2)得到的PCR产物中加入限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ，进行酶切，限制性内切酶CfrⅠ或其同切酶EaeⅠ的酶切位点为：Y∧GGCCR；
(4)琼脂糖凝胶电泳分析；
(5)鉴定结果的判断：若只有一条722bp的条带则供试样品为山银花，若有196bp和526bp两条带则供试样品为金银花。
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