[发明专利]合成型转录因子VP64‑linker‑Os03g11370在改良水稻籽粒性状方面的应用

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为（VP16）₄-linker-Os03g11370；

其中，linker由39个柔性氨基酸串联而成；VP16为来自单纯疱疹病毒的VP16蛋白；Os03g11370为水稻转录因子Os03g11370。

2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白为：

（1）SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（2）SEQ ID No.1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等功能的由（1）衍生的蛋白质。

3.编码权利要求1或2所述融合蛋白的基因。

4.根据权利要求3所述的基因，其特征在于，所述基因为VP64-linker-Os03g11370，其核苷酸序列为：

（1）SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列；

（2）在严格条件下，能够与（1）所示核苷酸序列杂交的核苷酸序列；其中，所述严格条件为65℃，在0.1×SSPE或0.1×SSC、0.1%SDS的溶液中杂交并洗膜。

5.含有权利要求3或4所述基因的表达载体。

6.根据权利要求5所述的载体，其特征在于，所述载体为表达载体ubi：VP64-Os03g11370，其构建方法包括如下步骤：

（1）以水稻日本晴的叶片为材料，提取总RNA，反转录得cDNA；

（2）根据Gateway克隆技术，进行两轮PCR，第一轮PCR模板为cDNA，引物为正向引物F1和反向引物R1；第二轮PCR模板为第一轮的PCR产物，引物为attB5'adaptor和attB3'adaptor；将第二轮的PCR产物克隆到pDONER载体上，测序鉴定正确后通过LR反应将Os03g11370构建到nVP64-hyg-asRED上,获得载体ubi：VP64-Os03g11370；

正向引物F1：5'-caaaaaagca ggcttcatgg aggaccagat ggctaacc-3'，

反向引物R1：5'-caagaaagct gggtcctcga gggtggtgcc gtc-3'；

attB5'adaptor：5'-gtggggacaa gtttgtacaa aaaagcaggc ttc-3'，

attB3'adaptor：5'-gtggggacca ctttgtacaa gaaagctggg tc-3'。

7.根据权利要求6所述的载体，其特征在于，步骤（2）中，第一轮PCR扩增的反应体系为：2×反应缓冲液25μl，dNTP4μl，ddH₂O18.5μl，Taq DNA聚合酶0.5μl，1μl cDNA、正反向引物各0.5μl；反应程序为热启动98℃预变性3min；起始反应98℃10s，57℃5s，72℃1min，30个循环；72℃延伸10min，最后25℃反应结束；

第二轮PCR扩增的反应体系与第一轮PCR相同；第二轮PCR的反应程序为：热启动98℃预变性3min；起始反应98℃10s，57℃5s，72℃1min，6个循环；72℃延伸10min，最后25℃反应结束。

8.含有权利要求5-7任一项所述载体的宿主细胞。

9.权利要求3或4所述的基因或权利要求5-7任一项所述载体在增加水稻粒长、粒宽及千粒重中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，其是将权利要求3或4所述的基因或权利要求5-7任一项所述载体转化水稻，筛选获得转基因水稻。