[发明专利]一种目标物的标记及识别的方法

权利要求书

1.一种目标物的标记及识别的方法，包括以下步骤：

将细胞进行固定及预处理；

通过两个带有第一荧光染料的探针分别标记细胞中的第一目标物和第四目标物，通过三个带有第二荧光染料的探针分别标记细胞中的第二目标物、第三目标物和第五目标物，其中，第一目标物与第三目标物相互交叠，第二目标物与第四目标物相互交叠，第五目标物与第一目标物、第二目标物、第三目标物及第四目标物无交叠，第一目标物与第四目标物的体积不相同，第二目标物与第三目标物的体积不相同；

通过一荧光成像系统对所述细胞进行荧光成像得到第一荧光图像和第二荧光图像；以及

合并所述第一荧光图像和第二荧光图像，分别计算所述第一至第四目标物的体积，通过第一荧光图像和第二荧光图像是否重叠以及上述计算的目标物体积的大小来识别所述第一至第五目标物。

2.如权利要求1所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述第一至第五目标物为全染色体、着丝粒、单个基因位点或基因片段。

3.如权利要求1所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述将细胞进行固定及预处理具体包括以下步骤：

提供一样品，从该样品中分离得到所述细胞，将所述细胞配制成一悬浮液；

将所述悬浮液涂片于一载玻片，并进行第一次孵育处理，所述载玻片为一防脱载玻片；

将载有细胞的载玻片浸入一固定液并保持一段时间以使细胞固定；

将固定后的细胞用一溶剂进行第一次洗涤处理；

将第一次洗涤处理后的细胞进行第二次孵育处理；

将经过第二次孵育处理后的细胞进行浸渍处理；

将浸渍后的细胞进行冻融处理；

将冻融后的细胞进行第二次洗涤处理；

将第二次洗涤处理后的细胞进行第三次孵育处理；以及

将第三次孵育处理后的细胞保存。

4.如权利要求3所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述第一次孵育处理为将所述细胞在温度为37℃，通入5%CO₂的培养箱中孵育20分钟~180分钟。

5.如权利要求3所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述保存第三次孵育处理后的细胞具体为将所述细胞保存于pH值为7.0的体积浓度为50%的甲酰胺溶液中至少24小时。

6.如权利要求1所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述识别和定位所述第一至第五目标物具体为：

判别第一目标物和第四目标物：对该第一荧光图像中的第一目标物和第四目标物的体积进行计算，通过计算结果判定体积较大的为第一目标物，体积较小的为第四目标物；

判别第二目标物和第三目标物：对该第二荧光图像中与第一荧光图像发生重叠的两种目标物的体积进行计算，通过计算结果判定体积较大的为第二目标物，体积较小的为第三目标物；以及

判别第五目标物：将所述多个探测通道的得到的第一荧光图像和第二荧光图像进行合并，并比较第一荧光图像与第二荧光图像是否发生重叠，其中，判定第二荧光图像中不与第一荧光图像发生重叠的为第五目标物。

7.如权利要求1所述的目标物的标记及识别的方法，其特征在于，所述第一至第四目标物的体积计算满足以下公式：

其中，为目标物的体积，为像素点在x方向的长度，为像素点在y方向的长度，为z方向步长，n为目标物所含像素点的个数。

8.一种目标物的标记及识别的方法，包括以下步骤：

将细胞进行固定及预处理；

通过三个带有第一荧光染料的探针分别标记细胞中的第一目标物、第四目标物和第六目标物，通过三个带有第二荧光染料的探针分别标记细胞中的第二目标物、第三目标物和第五目标物，其中，第一目标物与第三目标物相互交叠，第二目标物与第四目标物相互交叠，第五目标物及第六目标物与第一目标物、第二目标物、第三目标物、第四目标物均无交叠，第一目标物与第四目标物的体积不相同，第二目标物与第三目标物的体积不相同；

通过一荧光成像系统对所述细胞进行荧光成像得到第一荧光图像和第二荧光图像；以及

合并所述第一荧光图像和第二荧光图像，分别计算所述第一至第四目标物的体积，通过第一荧光图像和第二荧光图像是否重叠以及上述计算的目标物体积的大小来识别所述第一至第六目标物。