[发明专利]一种目标物的标记及识别的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种目标物的标记及识别的方法，尤其为一种采用荧光标记及识别目标物的方法。

背景技术

多项研究表明，染色体在细胞核中占据一个明显的区域，被称之为染色体域。染色体域在进化上是保守的，并且在细胞间期，它的空间构象也是非随机的。基因（遗传因子）是遗传的物质基础，是DNA或RNA分子上具有遗传信息的特定核苷酸序列。多数生物的基因在染色体上作线状排列。基因密度高的染色体往往分布在靠近细胞核中心的位置，而基因密度低的染色体则往往分布在外围。此外，染色体在细胞核中的分布位置也与染色体本身的大小有一定关系。有证据表明，染色体的这些非随机空间分布形式在基因表达调控中起着重要作用。除此之外，对其他遗传物质的空间组织形式的研究也将使人们更为深刻的了解相关生物学过程。人们发现着丝粒在调控基因沉默的表观遗传机制中同样起着至关重要的作用。

三维荧光原位杂交（3D fluorescence in situ hybridization,3D-FISH）是基于荧光原位杂交(FISH)技术发展而来，其为一将DNA探针运用于经过预处理的，三维形态保存完好样本的实验技术。其基本原理为：根据核苷酸碱基互补配对原则，使荧光标记的探针序列与靶DNA序列进行杂交，然后用合适的检测方法将荧光信号检出，达到目标物在三维空间定位的目的。该方法可以三维、原位的特异性标记细胞内特定的遗传物质。随着这项技术在相关领域的运用，人们要求能够同时标记数量较多的目标物。

当采用“一对一”（一种颜色荧光团标记一种目标物）的标记方式时，由于采用的样品信号探测仪器如激光共聚焦显微镜，最多也只能配置四到五个探测通道，这意味着最多只有三到四个目标物可以被同时标记并识别出来（最后一个通道用来探测细胞核），而这往往不能满足实验需要。

而其他方法比如组合标记（3D-M-FISH）、序列杂交（ReFISH），确实在一定程度上解决了多个目标物同时标记的问题。但是，3D-M-FISH方法的实现依赖于特殊的图像处理软件，并且该软件价格不菲。而ReFISH方法要求操作者能够两次准确无误的找到并标记同一个细胞核，这是一项非常耗时且对操作者的技术要求较高的工作。可见，这些方法中标记目标物的数量受限于所选的标记方法和所采用的实验仪器。

发明内容

综上所述，确有必要提供一种同时标记多个目标物且简单易行的目标物的标记及识别的方法。

一种目标物的标记及识别的方法，包括以下步骤：将细胞进行固定及预处理；通过两个带有第一荧光染料的探针分别标记细胞中的第一目标物和第四目标物，通过三个带有第二荧光染料的探针分别标记细胞中的第二目标物、第三目标物和第五目标物，其中，第一目标物与第三目标物相互交叠，第二目标物与第四目标物相互交叠，第五目标物与第一目标物、第二目标物、第三目标物及第四目标物无交叠，第一目标物与第四目标物的体积不相同，第二目标物与第三目标物的体积不相同；通过一荧光成像系统对所述细胞进行荧光成像得到多个荧光图像；以及，合并所述第一荧光图像和第二荧光图像，分别计算所述第一至第四目标物的体积，通过第一荧光图像和第二荧光图像是否重叠以及上述计算的目标物体积的大小来识别所述第一至第五目标物。

一种目标物的标记及识别的方法，包括以下步骤：将细胞进行固定及预处理；通过三个带有第一荧光染料的探针分别标记细胞中的第一目标物、第四目标物和第六目标物，通过三个带有第二荧光染料的探针分别标记细胞中的第二目标物、第三目标物和第五目标物，其中，第一目标物与第三目标物相互交叠，第二目标物与第四目标物相互交叠，第五目标物及第六目标物与第一目标物、第二目标物、第三目标物、第四目标物均无交叠，第一目标物的体积大于第四目标物的体积，第二目标物的体积大于第三目标物的体积；通过一荧光成像系统对所述细胞进行荧光成像得到第一荧光图像、第二荧光图像和背景荧光图像；以及，合并所述第一荧光图像和第二荧光图像，分别计算所述第一至第四目标物的体积，通过第一荧光图像和第二荧光图像是否重叠以及上述计算的目标物体积的大小来识别所述第一至第六目标物。

一种目标物的标记及识别的方法，包括以下步骤：将细胞进行固定及预处理；通过两个带有同种颜色的荧光染料的探针分别标记细胞中的第一目标物和第二目标物，其中，第一目标物与第二目标物的体积不相同；通过一荧光成像系统对所述细胞进行荧光成像得到一荧光图像；以及，分别计算所述荧光图像中的第一目标物和第二目标物的体积，通过计算的第一目标物和第二目标物体积的大小来识别所述第一目标物与第二目标物。