[发明专利]蜡样芽孢杆菌的快速分离新方法

权利要求书

1.蜡样芽孢杆菌的快速分离新方法，其特征在于包括以下步骤：（1）取2.8 mg多臂井星聚合物溶解于2 mL 0.02 M，pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N-羟基丁二酰亚胺NHSS，0.4 mg 乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；取6 mg 蜡样芽孢杆菌特异性抗体加入上述反应液中，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得多臂井星聚合物-抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mg NHSS，2.4 mg EDC溶解于2 mL PBS（ 0.02 M， pH 6.5）缓冲液中；加入0.55 mg多臂井星聚合物-抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-多臂井星聚合物-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品溶液，加入0.1 mg蜡样芽孢杆菌抗体和长链生物素共修饰的多臂井星聚合物即步骤（2）长链生物素-多臂井星聚合物-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速再室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁力分离后，用0.1%PBST洗涤后，用PBS缓冲液重悬即得捕获有蜡样芽孢杆菌的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-多臂井星聚合物-抗体-蜡样芽孢杆菌抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述多臂井星聚合物为多臂井星化聚酰胺-胺，其分子量为70000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述修饰了链霉亲和素的纳米磁珠粒径为20-50 nm，优选为30 nm。