[发明专利]一种高效快速的富集分离副溶血性弧菌方法

权利要求书

1.一种高效快速的富集分离副溶血性弧菌方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）每取1 mg树状超支聚合物溶解于2 mL 0.02 M，pH 6.5磷酸缓冲液PBS，加入0.6 mg N-羟基丁二酰亚胺NHSS，0.4 mg 乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC，室温置于混匀仪上搅拌，活化15 min；加入2.68 mg副溶血性弧菌特异性抗体，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得树状超支聚合物-抗体复合物；（2）取15 mg 长链生物素，3.6 mgN-羟基丁二酰亚胺NHSS，2.4 mg乙基3-（3-二甲氨基）碳二亚胺盐酸盐EDC溶解于2 mL 0.02 M pH 6.5 PBS缓冲液中；加入2.24 mg树状超支聚合物-抗体复合物，室温置于混匀仪上搅拌30 min；减压旋干溶剂，去离子水溶解，在PBS和去离子水中透析1 d；透析结束将得到的溶液冷冻干燥得长链生物素-树状超支聚合物-抗体复合物；（3）取1 mL待测样品溶液，加入0.1 mg副溶血性弧菌抗体和长链生物素共修饰的树状超支聚合物即长链生物素-树状超支聚合物-抗体复合物，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min；加入0.1 mg修饰有链霉亲和素的纳米磁珠，置于混匀仪上，以30 rpm的转速室温孵育15 min，常规磁力架分离3 min；（4）磁力分离后，用0.1% PBST (0.1% Tween 20)洗涤后，用PBS缓冲液重悬即得捕获有副溶血性弧菌的纳米磁珠-链霉亲和素-长链生物素-树状超支聚合物-抗体-副溶血性弧菌抗原复合物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述树状超支聚合物为为氨基化的树枝状化聚酰胺-胺，其分子量为56000 Da。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述纳米磁珠粒径为20-50nm，优选为30 nm。