[发明专利]分型诊断口蹄疫病毒的引物、探针及其试剂盒和使用方法

权利要求书

1.一套用于分型诊断口蹄疫病毒的引物及探针，其特征在于，所述引物针对各血清型口蹄疫病毒的保守片段设计，O型、AsiaI型、A型、C型四种口蹄疫病毒共用一条通用上游引物(SEQ No.1)、SAT1型、SAT2型、SAT3型三种口蹄疫病毒共用一条通用上游引物(SEQNo.2)，O型、AsiaI型、A型、C型、SAT1型、SAT2型、SAT3型七种口蹄疫病毒共用一条通用下游引物(SEQ No.3)，引物5’端均以生物素标记，其核苷酸序列为：

所述探针针对各血清型口蹄疫病毒的型特异性片段设计，探针5’端均加有10个T尾，其核苷酸序列为：

所述引物和探针可用于O型或者AsiaI型或者A型或者C型或者SAT1型或者SAT2型或者SAT3型的口蹄疫病毒或者其中的两种或者三种或者四种或者五种或者六种或者七种血清型口蹄疫病毒的聚合酶链式反应-反向斑点杂交分型诊断。

2.一种用于分型诊断口蹄疫病毒的试剂盒，其特征在于，包括O型、AsiaI型、A型、C型四种口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM1)，SAT1型、SAT2型、SAT3型三种口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM2)，固定有各血清型口蹄疫病毒探针的尼龙杂交膜(chip)，室温杂交液(Hyb)，洗液I(W1)，洗液II(W2)，碱性磷酸酶标记的链霉亲和素(AP)，碱性磷酸酶缓冲液(Bufferl)，显色底物(NBT/BCIP)，显色缓冲液(Buffer2)和聚合酶链式反应预混合液(RM)，其特征在于，所述试剂盒可以进行O型或者AsiaI型或者A型或者C型或者SAT1型或者SAT2型或者SAT3型口蹄疫病毒或者其中的两种或者三种或者四种或者五种或者六种或者七种血清型口蹄疫病毒的分型诊断。

所述的O型、AsiaI型、A型和C型四种口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM1)，其特征在于，是由如权利要求1所述的上引物(SEQ No.1)与下引物(SEQ No.3)按照1∶1的比例配制而成的，引物浓度为10μmol/L；所述的SAT1型、SAT2型和SAT3型三种口蹄疫病毒通用PCR上游引物溶液(PM2)，其特征在于，是由如权利要求1所述的上游引物(SEQ No.2)与下引物(SEQ No.3)按照1∶1的比例配制而成的，引物浓度为10μmol/L；所述的固定有各血清型口蹄疫病毒探针的尼龙杂交膜(chip)，其特征在于，固定有如权利要求1所述的七种分型诊断口蹄疫病毒探针(SEQ No.4、SEQ No.5、SEQ No.6、SEQ No.7、SEQ No.8、SEQ No.9、SEQ No.10)中至少一种探针，同时设置带生物素标记的核苷酸序列为阳性对照，设置DEPC水为阴性对照，各血清型口蹄疫病毒探针的点样浓度为50-100μmol/L，优选浓度为100μmol/L，点样量为0.5μL。所述的室温杂交液(Hyb)，包括3mL的20×SSPE、100μL的20％SDS和一定量的甲酰胺，并用水补足至20mL，其特征在于，甲酰胺的用量为3-6mL，其优选用量为5mL。