[发明专利]一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法

权利要求书

1.一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于，包括下列步骤：取大叶蚁塔无菌外植体，在无菌环境下，经初代培养、增殖培养、叶盘法诱导不定芽培养、生根培养，获得生根试管苗，进行栽种。

2.根据权利要求1所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于，所述的初代培养为：选择并清洗、消毒处理大叶蚁塔茎尖获得起始的无菌外植体，接种到初代培养基上，进行初代培养，获得无菌苗；

增殖培养：是将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，诱导丛生芽；

叶盘法诱导不定芽培养：取诱导出丛生芽的无菌苗的幼嫩叶片，转移至不定芽诱导培养基培养，诱导出不定芽；

生根培养：将叶盘法诱导分化的不定芽，从叶盘上切下，取高度为0.5cm左右，转移至生根培养基中，获得生根试管苗；

最后，对所得的生根试管苗进行清洗，移至珍珠岩、草炭土、腐殖质的混合基质中进行栽种。

3.根据权利要求1或2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的大叶蚁塔无菌外植体的获得方法为：取大叶蚁塔肥厚的茎尖，切取成为长度0.5~1cm，直径为0.3~0.6cm的圆柱体，并使顶芽生长点位于圆柱体的中央，保留两片叶柄基部，保护生长点，用洗洁精擦洗表面，流水冲洗20分钟，再进行消毒处理；消毒处理方法是：先用72%浓度的酒精消毒30~60s，再用无菌水冲洗3~4次，然后用加有2~4滴吐温-80（油酸酯）的0.1~0.2%的升汞液浸泡15~30分钟，无菌水冲洗至无残留，得到无菌外植体。

4.根据权利要求2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的增殖培养基为： MS+6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.1~2.5mg·L^-1+奈乙酸（NAA）0.1~0.5mg·L^-1+蔗糖25~35g·L^-1+琼脂4~8g·L^-1。

5.根据权利要求2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的叶盘法诱导不定芽培养基为：MS+玉米素（ZT）0.15~2.5mg·L^-1+奈乙酸（NAA）0.1~0.5mg·L^-1+蔗糖25~35 g·L^-1+琼脂4~8 g·L^-1。

6.根据权利要求2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的生根培养基为：1/2MS+奈乙酸（NAA）0.1~2.5mg·L^-1+蔗糖15~25g·L^-1+琼脂4~8g·L^-1。

7.根据权利要求1或2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述初代培养基为：MS+6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.15~0.25mg·L^-1+奈乙酸（NAA）0.15~0.25mg·L^-1+蔗糖25~35g·L^-1+琼脂4~8g·L^-1。

8.根据权利要求1或2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的初代培养、增殖培养、叶盘法诱导不定芽培养和生根培养的培养条件均为无菌环境，光周期为10~15h/d，光照强度1500~2500lx，培养温度为室温，初代培养的周期为22~28天，增殖培养的周期为28~32天，叶盘法诱导不定芽发生培养的周期为18~22天，生根培养的周期为28~32天。

9.根据权利要求1或2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的生根培养步骤中：将生根试管苗置于自然环境中6~10天，取出洗净根部，用500~600倍托布津水溶液浸泡数秒，移栽到草炭土、珍珠岩和腐殖质的混合基质中，起始30天内保持苗的叶面湿润，相对湿度为95%左右，并适当遮阳，待新的根系发育完整后，再逐渐降低湿度，加强光强至全光照。

10.根据权利要求2所述的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，其特征在于：所述的生根试管苗移栽入混合基质的营养成分为草炭土:珍珠岩:腐殖质＝1:1:1。