[发明专利]一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物快繁方法技术，尤其涉及了一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法。 

背景技术

大叶蚁塔（Gunnera manlcata L.），小二仙草科根乃拉草属多年生草本，植株的高度可达2～3米，原产南美洲巴西亚马逊河流域一带。超大型观叶植物，整片叶子就像一把带刺的雨伞，直径可达4米，最大的叶片能把3个并排骑马的人，连人带马遮盖住，寻常叶片能盖住一个成人。是世界上目前发现的草本植物中叶片硕大的植物之一，已被收录入吉尼斯世界纪录。种子却极其细小，种皮也极其坚硬，不透水，不透气，休眠期长，萌发率极低。 

目前国内大叶蚁塔数量不多，未见结籽，分株、切根等繁殖速度极慢，周期长，不利于优良种苗的推广。其次因其原产于亚马逊河流域热带雨林，喜欢温暖湿润气候，上海曾经几次引种大型种苗，却都难以成活。因此我们采用了离体培养的方式，建立快速繁殖技术，除繁育优质种苗降低昂贵的引种费之外，并通过控制光照、温度、湿度，从幼苗期开始驯化，使之能逐步适应上海甚至长三角的土壤条件和气候条件，让市民早日欣赏到这一奇特植物。该植物在生物学观察、栽培种植、快速繁育方面，目前未见任何报道。 

发明内容

本发明针对现有技术中大叶蚁塔在国内温带地区繁殖速度极慢，生长周期长，繁育优质种苗费用昂贵等缺点，提供了一种采用离体培养的方式，建立快速繁殖技术，通过控制光照、温度、湿度，从幼苗期开始驯化，使之能逐步适应上海甚至长三角的土壤条件和气候条件，具有周期短，繁殖系数高、生产步骤衔接紧密、成本低廉的一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法。 

本发明中，所用到的培养基及激素包括：MS培养基（Murashing and Skoog medium，以下简称MS），MS配方中的药品成分和培养基的具体配制方法为现有公知技术，在此不再赘述。附加的植物激素为6-苄基氨基嘌呤(benzylaminopurine，简称为6-BA)、奈乙酸（naphthylene acetic acid，简称为NAA）、玉米素（Zeatin，以下简称为ZT）。 

为了解决上述技术问题，本发明通过下述技术方案得以解决： 

一种大叶蚁塔离体培养和快速繁殖的方法，包括下列步骤：取大叶蚁塔无菌外植体，在无菌环境下，经初代培养、增殖培养、叶盘法诱导不定芽培养、生根培养，获得生根试管苗，进行栽种。 

作为优选，所述的初代培养为：选择并清洗、消毒处理大叶蚁塔茎尖获得起始的无菌外植体，接种到初代培养基上，进行初代培养，获得无菌苗； 

增殖培养：是将初代培养的无菌苗转入增殖培养基，诱导丛生芽；

叶盘法诱导不定芽培养：取诱导出丛生芽的无菌苗的幼嫩叶片，转移至不定芽诱导培养基培养，诱导出不定芽；

生根培养：将叶盘法诱导分化的不定芽，从叶盘上切下，取高度为0.5cm左右，转移至生根培养基中，获得生根试管苗；

最后，对所得的生根试管苗进行清洗，移至珍珠岩、草炭土、腐殖质的混合基质中进行栽种。

叶盘法诱导不定芽培养即叶盘法诱导不定芽分化培养；叶盘法诱导不定芽培养基即叶盘法诱导不定芽分化培养基。 

作为优选，所述的大叶蚁塔无菌外植体的获得方法为：取大叶蚁塔肥厚的茎尖，切取成为长度0.5~1cm，直径为0.3~0.6cm的圆柱体，并使顶芽生长点位于圆柱体的中央，保留两片叶柄基部，保护生长点，用洗洁精擦洗表面，流水冲洗20分钟，再进行消毒处理；消毒处理方法是：先用72%浓度的酒精消毒30~60s，再用无菌水冲洗3~4次，然后用加有2~4滴吐温-80（油酸酯）的0.1~0.2%的升汞液浸泡15~30分钟，无菌水冲洗至无残留，得到无菌外植体。 

作为优选，所述的增殖培养基为：MS+6-苄氨基嘌呤（6-BA）0.1~2.5mgL^-1+奈乙酸（NAA）0.1~0.5mgL^-1+蔗糖25~35gL^-1+琼脂4~8gL^-1，诱导出丛生芽。增殖培养基优选为：MS+6-苄氨基嘌呤（6-BA）1mgL^-1+奈乙酸（NAA）0.1mgL^-1+蔗糖30gL^-1+琼脂6 gL^-1，丛生芽增殖率为1:3~5。