[发明专利]磷酸肌酸二钠盐及其杂质阴离子含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种磷酸肌酸二钠盐及其杂质阴离子含量的检测方法。

背景技术

磷酸肌酸二钠盐是一种心肌保护剂（结构式如下），临床用于缺血状态下的心肌代谢异常，如心肌缺血、肥厚、心梗及心衰的治疗。由于存在高能磷酸键，磷酸肌酸二钠盐在水中和质子存在下，极易分解为磷酸盐和肌酸；同时，该药物极性大，只溶解与水，不溶于甲醇和乙醇等常用溶剂，制备过程中不容易除去水溶性磷酸盐、氯化物等。

目前磷酸肌酸二钠盐及制剂的有关检测方法均主要采用高效液相色谱仪和紫外检测器测定，如郭兴辉等报道的RP-HPLC法测定注射用磷酸肌酸钠有关物质的含量【中国药房，2013，24（9），840-842】；张晓平等报道的“高效液相色谱法测定磷酸肌酸二钠盐含量及应用”【天津药学，2003，15（1），18】；于忠辉等报道的“反相离子色谱对高效液相色谱法测定磷酸肌酸二钠盐的含量”【中国药学与临床，2005，5（11），865】。使用离子对试剂，检测波长均在210nm，受溶剂影响较大，基线噪音强，测定时系统平衡稳定时间至少需要12小时，影响测定效率，且紫外检测器无法测定到没有紫外吸收的物质，尤其是磷酸盐等无机阴离子，不能完全控制磷酸肌酸二钠盐的杂质。

中国专利CN101034086B公开了一种磷酸肌酸二钠盐中杂质的检测方法，其使用离子对色谱法，蒸发光检测器测定，测定中检测限低，均在130～320ng左右，达不到测定要求，也无法测定和控制磷酸肌酸二钠盐的无机杂质，这也正是蒸发光检测器本身检测限度低所致的，本发明使检测限提高了1000倍以上。

磷酸肌酸二钠盐的含量测定方法目前主要有酶法和高效液相色谱法两种方法。酶法如郝苏丽等报道的“磷酸肌酸钠含量测定的研究”采用特异性联合酶测定含量，使用几个特异性的酶反应，采用紫外分光光度计、外标法测定磷酸肌酸含量【药物分析杂志，2003，23（4），341】。高效液相色谱法如上述3篇文献报道的，与测定杂质相同，溶液本身不稳定，必须现配现用，且无法连续进样，精密度和准确度低。以上两种方法均需磷酸肌酸二钠盐对照品，外标法测定。

磷酸肌酸二钠盐对照品，价格昂贵，含4个结晶水，由于对热不稳定，对照品不能烘干至恒重，使用时需要对水分进行标定；上市产品磷酸肌酸钠本身也含有水分，测定含量也需要另外测定水分，计算时扣除水分，使得最终测定结果引入了两次系统误差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种全新的磷酸肌酸二钠盐及其杂质阴离子含量的检测方法。该方法不需要磷酸肌酸钠对照品，以国家标准物质“水中磷酸根”作为对照品，此标准物质稳定、准确、可靠、易储存，价格便宜，同时，整个测定过程中不使用任何有机溶剂，减少了对测定人员和环境的污染。

本发明方法的特点在于采用离子色谱仪、电导检测器测定杂质无机阴离子的含量。离子色谱（Ion Chromatography，简称IC），本发明采用的是抑制型离子色谱，其灵敏度高，检测下限可达到ng/ml，甚至ng/L级。

所述的磷酸肌酸二钠盐及其杂质阴离子含量的检测方法，具体如下：

色谱柱：阴离子交换柱。

氢氧化钠淋洗液浓度：20～40mmol/L，优选30mmol/L。

流速：0.5～1.5ml/min。

柱温：15℃～35℃，优选30℃。

抑制电流：80～100mA，优选90mA。

进样量：25μl。

供试品溶液A（临配现用）：精密称取磷酸肌酸钠，置量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得，作为测定样品中的杂质无机阴离子。

供试品溶液B：精密称取磷酸肌酸钠，置量瓶中，加入酸1ml，使磷酸肌酸二钠盐完全降解为磷酸盐和肌酸。所述酸为盐酸、硫酸和硝酸之一，优选盐酸，酸的浓度0.01mol/L～0.1mol/L，优选0.1mol/L。其中降解温度40℃～90℃，优选80℃，加热5min～30min，优选15min。放冷至室温后，用水定容，精密吸取2ml至10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

对照溶液：精密量取“标准物质GBW(E)081215，0.1g/L水中磷酸根，”对照溶液，加水稀释至1～40μg/ml，优选20μg/ml。

分别取供试品溶液和对照品溶液各25μl进样，记录色谱仪，按外标法，以磷酸根峰面积计算总磷酸根含量，减去游离磷酸根含量，乘以系数2.6858换算成磷酸肌酸二钠盐含量即可。