[发明专利]一种束花山茶组培快速繁殖育苗方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种束花山茶组培快速繁殖育苗方法。

背景技术

束花山茶是以连蕊茶（Sect.Theopsis）为母本杂交培育出的新品种山茶，花小而密，花色艳丽、花量大、花期长，新叶红色，适应江南地区湿热的夏季气候。束花山茶是一种全新山茶品种，有别与传统茶花品种孤植、群植等相对单一的应用形式，束花山茶品种可以作为花篱、绿篱、盆景及景观树种，具有很高的观赏价值和经济价值。而目前国内对植物新品种保护力度较低，新品种推广容易面临被他人剽窃的风险。因此，大规模集中上市，从而产生规模效应和价格优势是目前新品种推广的策略之一。然而，山茶传统繁殖方式以扦插为主，繁殖系数低，难以满足规模化生产中对种苗的需求，难以做到短期内大量上市的要求。

组培扩繁技术不但可以大幅提高山茶的繁殖系数，而且，能够保持母本形状的一致性，为大规模生产山茶提供整齐一致的种苗。但是，山茶作为木本植物组织培养体系并不完善，组培研究中存在很多困难亟待解决，尤其是山茶组培苗生根困难。现有的山茶组织培养技术中，一般是山茶组培苗经过诱导生根培养后移栽，不仅生根率低、生产周期长，而且移栽成活困难，导致成苗率低。

发明内容

本发明的目的在于提供一种束花山茶组培快速繁殖育苗方法，以克服山茶组织培养生根困难，以及传统扦插繁殖方式中繁殖系数低、生产周期长，难以满足新品种短时间大批量上市的需求等困难，大幅提高束花山茶繁殖效率，缩短上市周期，而且能够生产无病虫害、一致性较强的种苗，针对性强、适应性好、可操作性强，实现束花山茶的工厂化快速育苗生产。

本发明通过如下技术方案实现的：

一种束花山茶组培快速繁殖育苗法，包括如下步骤：

（1）外植体的选择：选择无病虫害、饱满且刚萌动的束花山茶顶芽为外植体。

（2）外植体的预处理和消毒：将步骤1）选取的顶芽用洗洁精搓洗2～3次，用纱布包裹，在流水下冲洗20～30min后，在1000～2000mg/L的头孢拉丁液中浸泡1～2h，清水清洗干净；用75%酒精消毒90s，再用0.1%升汞消毒5～15min，无菌水清洗3～5次。

（3）外植体诱导培养：将消毒好的顶芽剥去外层包裹的2～3层叶片，然后接种在诱导培养基上，诱导出不定芽。

（4）增殖培养：将诱导出的不定芽切分后接种在增殖培养基上，进行增殖培养。

（5）移栽生根：将增殖培养出的高度3～5cm的无菌苗，从瓶中取出，切去愈伤组织，经生根液浸泡处理后移栽至装有园艺基质的穴盘上生根培养。遮光培养，遮光率45～50%，每隔5～10分钟喷水一次，直到无菌苗生根。其中，所述生根液为吲哚丁酸（IBA）或萘乙酸（NAA）中的一种或两种混合液。

进一步，步骤（3）中所述诱导培养基为：MS基本培养基以及6-苄氨基嘌呤（6-BA）1.0～2.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～1.0mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6.0～7.0g/L、pH5.8～6.0。诱导培养条件为：温度为24±1℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为12～14h/d。

步骤（4）中所述增殖培养基为：MS基本培养基以及6-苄氨基嘌呤（6-BA）2.0～3.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～1.0mg/L、赤霉素（GA3）0.5～1mg/L、蔗糖30～40g/L、琼脂6.0～7.0g/L、pH5.8～6.0。增殖培养条件为：温度为24±1℃，光照强度为1500～2000Lx，光照时间为12～14h/d。

步骤（5）中园艺基质的配比为（体积比）：蛭石：珍珠岩=1：4～8，经高温消毒后可重复使用。

步骤（5）中所述生根液为吲哚丁酸（IBA）0.5～1.0mg/L、萘乙酸（NAA）0.5～1.0mg/L中的一种或两种混合液。

本发明中所用的1000～2000mg/L的头孢拉丁液由人体口服的头孢拉丁胶囊配制。

本发明所用培养基的配制方法均按常规植物组织培养培养基的配制方法配制，其中常规配制过程中用的蒸馏水可以用自来水替换。

经试验验证，本发明培育出的束花山茶的增殖率在300%以上，生根率为90%以上，移栽成活率达到86%以上，培育的无菌苗生长势强、植株大小一致性高，病虫害少，能够保持母本性状，遗传性状稳定。

本发明的有益效果是：

1.本发明首次利用头孢拉丁胶囊等医用抗病毒药物对束花山茶外植体进行脱毒，所用医用药品能有效抑制真菌和细菌生长，降低初代培养的污染率，且价格便宜，操作简单易行。