[发明专利]一种阿魏菇与胶红酵母共发酵生产漆酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及漆酶的微生物发酵生产方法，尤其涉及利用阿魏菇和胶红酵母共发酵生产漆酶的方法，属于微生物发酵技术领域。

背景技术

漆酶(benzenediol:oxygen oxidoreductase,EC1.10.3.2)是一种含铜的多酚氧化酶，一般含有4个铜离子，属于铜蓝氧化酶蛋白家族。漆酶是单电子氧化还原酶，能够催化酚类物质发生氧化反应，同时伴随分子氧还原生成水，其催化底物包括酚及其衍生物、芳胺及其衍生物、羧酸及其衍生物以及一些金属离子等。由于其作用底物广泛，漆酶在食品工业、制浆造纸、人工合成染料脱色、新型环保材料研制等领域具有巨大的价值。

在化学合成领域，漆酶可以催化合成高分子化合物，亦可参与降解稠环芳香化合物；漆酶可以催化氧化甲基、甲氧基、氯和硝基取代的4-(4’-磺酸基苯偶氮)苯酚等酚偶氮染料；在兰格缪尔槽中可以催化以4-四十烷氧基苯酚和六十烷基苯胺为单体的聚合反应来合成二维电光高分子网络。反应所利用的酶-水溶液-缓冲体系与传统的大量利用有机溶剂的高分子聚合体系相比，可以大大减少环境污染。

在造纸技术中，漆酶主要应用于生物制浆、生物漂白和造纸废水处理方面。木质原料中的纤维物质与木质素紧密结合交联在一起，需采用化学或物理方法来降解或去除木质素以达到分离的目的，漆酶具有良好的降解木质素的能力，且无化学法和物理法的能耗高、污染大等缺点，因此在造纸制浆领域具有广阔的应用前景，此外，用漆酶处理造纸废水，可以显著降低废水的COD浓度、色度和毒性。

在食品工业中，漆酶的应用是近20年发展起来的，主要包括饮料加工、食品成分测定等方面。漆酶能够氧化多酚类物质生成多酚氧化物，多酚氧化物自身再发生聚合形成可以被滤膜截留的大颗粒，改善了由于饮料中酚类化合物氧化反应引起的饮料后混浊、色泽加深及香味口感下降等现象，最终达到净化饮料的目的。

白腐真菌是目前自然界中漆酶的主要生产者，其中已经发现有多种具有产漆酶能力的侧耳类真菌，如糙皮侧耳（平菇）、刺芹侧耳（杏鲍菇）、环柄侧耳（凤尾菇）等。阿魏侧耳(Pleurotus ferulae Lenzi)又称阿魏菇，在我国是新疆特有的菇类，主要分布于新疆的伊犁、塔城、阿勒泰和木垒等地区，是寄生在药用植物“阿魏”腐败根茎上的一种重要食药用真菌。目前，有关阿魏菇发酵产漆酶的研究尚鲜见报道，申请号CN201210094741.1的专利“一种利用阿魏菇液体发酵产漆酶的方法”公开了一种利用阿魏菇液体发酵生产漆酶的工艺，但其产酶水平和漆酶酶活还有待进一步提高。

发明内容

针对现有技术存在的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种阿魏菇与胶红酵母共发酵生产漆酶的方法。本发明共培养液体发酵工艺可显著提高阿魏菇的产漆酶水平，所产漆酶酶活性高，符合产业化生产需求。

本发明的技术方案如下：

一种阿魏菇与胶红酵母共发酵生产漆酶的方法，是将阿魏菇种子液和胶红酵母的种子液先后接种至发酵培养基进行液体共发酵培养，得到含漆酶的发酵液。

其于具体步骤如下：

（1）制备阿魏菇种子液：取经组织分离得到的阿魏菇菌种接种至阿魏菇斜面培养基，于24～26℃培养至菌丝体长满斜面；将该斜面菌种接种至阿魏菇种子培养基，于24～26℃℃振荡培养6～8d，摇床转速150～200r/min，得阿魏菇活化种子液；

（2）制备胶红酵母种子液：取胶红酵母菌种接种至酵母斜面培养基，于30～32℃培养2～3d；将该斜面菌种接种至酵母种子培养基，于30～32℃振荡培养44～52h，摇床转速150～200r/min，得胶红酵母活化种子液；

（3）阿魏菇和酵母共发酵：将步骤（1）所得阿魏菇活化种子液按体积比3～5%的接种量接种至共发酵培养基，于24～26℃振荡培养1～4d，摇床转速150～200r/min；再按体积比2～6%的接种量接种上步骤（2）所得胶红酵母活化种子液，于相同条件下继续发酵培养3～6d，结束发酵，即得含漆酶的发酵液；所述共发酵培养基成分以g/L计为葡萄糖15～20，玉米粉10～20，麸皮10～15，KH₂PO₄2～3，MgSO₄·7H₂O2～3，其余成分为水，起始pH8.0，121℃灭菌20min。

其进一步的技术方案为：

所述胶红酵母为胶红酵母（Rhodotorula mucilaginosa）JM401，保藏编号为CCTCC NO:M2013088。