[发明专利]黄曲霉中与唑类药物敏感性相关的蛋白AFLA-216及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种蛋白质，是如下（a）或（b）的蛋白质：

（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

（b）将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与黄曲霉对唑类药物敏感性相关的由序列表序列1衍生的蛋白质。

2.权利要求1所述的编码基因。

3.根据权利要求2所述基因，其特征在于：所述基因为如下1）或2）或3）的DNA分子：

1）序列表中序列2所示的DNA分子；

2）在严格条件下与1）限定的DNA序列杂交且编码与黄曲霉对唑类药物敏感性相关的蛋白的DNA分子；

3）与1）或2）限定的DNA序列具有90%以上同源性且编码与黄曲霉对唑类药物敏感性相关的蛋白的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。

5.以权利要求1所述蛋白质或权利要求2或3所述基因为靶点的产品在制备调控黄曲霉对唑类药物敏感性药物中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述唑类药物为伊曲康唑、伏立康唑和/或氟康唑。

7.具有如下A）—C）至少一种功能的物质在制备增强黄曲霉对唑类药物敏感性的产品、黄曲霉抑制剂和/或由黄曲霉引起的侵袭性曲霉病治疗药物中的应用：

A）降低黄曲霉中权利要求1所述蛋白质的表达量；

B）降低黄曲霉中权利要求2或3所述基因的转录水平；

C）敲除或破坏黄曲霉中权利要求2或3所述基因。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述唑类药物为伊曲康唑、伏立康唑和/或氟康唑。

9.基因敲除载体pDHt/afla:pyrG，是按照包括如下步骤的方法制备得到的：

将序列表序列3所示DNA片段插入质粒pDHt的KpnI和ApaI位点间，获得中间载体；再将所述中间载体上的两个BglⅡ位点间的片段替换为序列表序列4所示DNA片段；

所述质粒pDHt是按照包括如下步骤的方法制备得到的：将Ti质粒pGreenII用HpaI和StuI双酶切，回收0.8kb的片段，将粘性末端补平后，插入到质粒pCAMBIA1300两个PvuII位点间，得到所述质粒pDHt。

10.重组黄曲霉菌△AFLA216，是按照包括如下步骤的方法制备得到的：

将所述基因敲除载体pDHt/afla:pyrG转化黄曲霉菌株3357-5，获得导入具如下序列DNA片段的重组黄曲霉菌：序列表序列3的第1—754位序列、序列表序列4序列和序列表序列3的第1294—2541位序列依次相连组成的序列。