[发明专利]一种肿瘤外切酶体疫苗的提取方法及其应用无效
| 申请号： | 201310235443.4 | 申请日： | 2013-06-14 |
| 公开（公告）号： | CN103340903A | 公开（公告）日： | 2013-10-09 |
| 发明（设计）人： | 曹利平;陈炯煌;阙日升 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61K35/16 | 分类号： | A61K35/16;A61P35/00 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 张法高;赵杭丽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肿瘤 外切 疫苗 提取 方法 及其 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种肿瘤外切酶体疫苗的提取方法，其特征在于，通过以下步骤实现：
（1）提取：胎牛血清在4℃条件下，离心6h，除去内源性exosome，人胆管癌细胞在含10％的胎牛血清的1640培养液中，培养约72h，收集培养基上清，按药品生产质量管理规范标准提取肿瘤外切酶体，上清液离心5分钟，转移至新的离心管离心30分钟，再转移至新的离心管离心30分钟，去除细胞碎片；上清液再用millipore公司超滤管离心30分钟；将浓缩液移至30 g／L的蔗糖重水垫上，超速离心60分钟，取出蔗糖重水垫，稀释到50ml的PBS中，再用超滤管离心，直至体积<5 ml，以0.22um的滤器过滤除菌，分装后置于-80℃冰箱备用；
（2）提取裂解超滤液：取超速离心后的exosome沉淀，加入去离子水10ml，低渗法使exosome破膜，用millipore公司超滤管离心30分钟去除miRNA提纯exosome裂解超滤液。
2.根据权利要求1所述的一种肿瘤外切酶体疫苗的提取方法在获得不含miRNA的exosome裂解超滤液中应用。
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