[发明专利]一种生产饲用抗菌肽的家蚕生物反应器及其构建方法

权利要求书

1.一种表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，包括：牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蚕素AD基因序列或将其与绿色荧光蛋白融合后，将它们克隆到杆状病毒转移载体中，构建得到转移表达载体；将构建的转移表达载体与杆状病毒DNA在大肠杆菌中进行转座重组，获得重组杆状病毒；将重组杆状病毒感染昆虫宿主；培养被感染的昆虫宿主表达相应的牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蚕素AD；收获并干燥处理所表达的抗菌肽。

2.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的抗菌肽牛蛙抗菌肽temporin-1Sd和天蚕素AD的核苷酸序列如序列表中的序列1和序列2所示，相应的氨基酸序列如序列表中的序列3和序列4所示。

3.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的杆状病毒运载载体选自pfastbac-dul双启动子，可以同时表达两种抗菌肽或同一种抗菌肽的两个拷贝。

4.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述构建得到的转移表达载体是带有抗菌肽基因原始序列的载体pfast-temporin-1Sd-AD，pfast-cecropin AD-AD，和带有抗菌肽融合蛋白序列的载体pfast-temporin-1Sd-gfp-AD，pfast-cecropin AD-gfp-AD。

5.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的杆状病毒DNA为BmNPV。

6.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的重组杆状病毒选自以下任意一种重组病毒：重组家蚕核型多角体病毒rBmNPV-temporin-1Sd-cecropinAD；重组家蚕核型多角体病毒rBmNPV- temporin-1Sd-gfp-cecropin AD；重组家蚕核型多角体病毒rBmNPV- gfp temporin-1Sd -cecropin AD。

7.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，特征在于所述的昆虫宿主包括家蚕、蓖麻蚕、樗蚕、樟蚕、日本柞蚕、柞蚕、野蚕、野天蚕及相应的昆虫细胞。

8.按照权利要求1所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的昆虫宿主是家蚕幼虫和蛹；所述的感染是指重组杆状病毒通过吞食或透过表皮来感染1-5龄的昆虫幼虫或蛹体。

9.按照权利要求8所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于，所述的感染1-5龄的昆虫幼虫或蛹体将重组家蚕杆状病毒感染家蚕细胞或穿刺接种1-5龄的家蚕幼虫或蛹，在感染3-6天后收集家蚕幼虫或蛹的体液或组织匀浆。

10.按照权利要求9所述的表达牛蛙抗菌肽 temporin-1Sd和天蚕素cecropin AD的方法，其特征在于所述的蛹体为1-2天的早期嫩蛹。