[发明专利]乳胶增强型AFP检测试剂盒及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及医学免疫体外诊断领域，具体涉及一种乳胶增强AFP检测试剂盒及其制备方法和应用。

背景技术

甲胎蛋白(AFP)主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降，出生时血浆中浓度为高峰期的1％左右，约40mg/L，在周岁时接近成人水平(低于30μg/L)。

产妇羊水或母体血浆中AFP可用于胎儿产前检测。如在神经管缺损、脊柱裂、无脑儿等时，AFP可由开放的神经管进入羊水而导致其在羊水中含量显著升高。胎儿在宫腔内死亡、畸胎瘤等先天缺陷亦可有羊水中AFP增高。AFP可经羊水部分进入母体血循环。在85％脊柱裂及无脑儿的母体，血浆AFP在妊娠16-18周可见升高而有诊断价值，但必须与临床经验结合，以免出现假阳性的错误。

由于血清AFP的含量低，其测定方法需要较高的灵敏度和特异性。由最初免疫电泳的定性检测，到放射免疫、荧光免疫和酶免疫的定量检测，以及到免疫比浊的自动化检测，发展十分迅速。单向免疫扩散(SRID)、放射免疫测定法(RIA)、荧光免疫测定发(FIA)、时间分辨荧光免疫测定法(TRFIA)、化学发光测定法。目前，化学发光是最为普遍通用的方法，但是化学发光仪器昂贵，且主要集中在三甲医院，对于AFP项目推广具有很大局限性，采用乳胶增强免疫比浊法后，可以推广到全国各级医院。本发明AFP检测试剂盒采用了特殊的乳胶微球信号放大技术，试剂灵敏度可以达到0.5ng/ml，完全可以应用于全自动生化仪检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳胶增强AFP检测试剂盒检测试剂盒，它操作简便、快速、灵敏度高、特异性好。

本发明克服背景技术所存在的问题，提出了一种新的乳胶增强型AFP检测试剂盒，其包括R1试剂、R2试剂和校准品。其中，R1试剂包括：PH7.3-7.5的Tris缓冲液50-100mmol/l、Dextran8000-10000 3-4％、和乙二胺四乙酸二钠20-40mmol/L；R2试剂包括：鼠抗人AFP单克隆抗体、聚苯乙烯胶乳包被、PH7.0-7.4的磷酸盐缓冲液、和乙二胺四乙酸二钠等；校准品包括：叠氮钠0.6-2.2％、吐温-20 2-8％、牛血清白蛋白1-3％。本发明中，上述百分比为牛血清基质体积用量的百分比。

本发明乳胶增强型AFP检测试剂盒中，所述R2试剂中的鼠抗人AFP单克隆抗体和聚苯乙烯胶乳包被的质量比为1/10-2/10。

本发明乳胶增强型AFP检测试剂盒中，采用纳米微球包被单克隆抗体，提高了试剂灵敏度，可以直接用于全自动生化分析仪。

本发明还提出了乳胶增强型AFP检测试剂盒的制备方法，包括试剂R1制备、试剂R2制备。

所述R1试剂的制备过程为：依次将下列成分Tris缓冲液50-100mmol/l、Dextran8000-10000 3-4％和乙二胺四乙酸二钠20-40mmol/L溶解调节PH值至7.3-7.5。

所述R2试剂的制备过程为：将鼠抗人AFP单克隆抗体和180-220nm的聚苯乙烯胶乳粒子以30∶100的质量比混合，缓冲液采用0.02M的磷酸缓冲液，将两者混匀后37℃吸附8小时，之后透析除去未连接上的抗体，加入封闭液0.1％牛血清白蛋白和0.2mm的甘氨酸，封闭2小时，离心去上清，用PH7.4磷酸盐缓冲液45mmol/l，乙二胺四乙酸二钠10.2mmol/l，0.05％牛血清白蛋白，0.9％NaN3稀释至0.18％。

其中，在所述R2试剂中抗体包被过程中，封闭液组分包括0.6-1.2％牛血清白蛋白、10-50mm的甘氨酸，胶乳稀释液组分包括PH7.0-7.6磷酸盐缓冲液30-80mmol/l，0.5-1.5％牛血清白蛋白，0.9％NaN3。

所述校准品制备过程为：将经过处理的牛血清，加入BAS0.1％，NaN30.9％得到校准品稀释液。

本发明还提出了乳胶增强型AFP检测试剂盒在检测AFP中的应用。本发明乳胶增强型AFP检测试剂盒可直接在全自动生化分析仪上使用。

本发明有益效果包括：操作简便、快速、灵敏度高、特异性好。

附图说明

图1是实施例1的本发明试剂定标曲线示意图。

图2是实施例3血清相关性示意图。

具体实施方式