[发明专利]一种从地黄中分离高纯度水苏糖的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然产物提取分离技术领域，具体涉及一种从地黄中分离提取水苏糖的方法。

背景技术

水苏糖作为一种新兴的功能性四聚寡糖，是一种优良的功能性食品原料，具有改善机体健康的作用，该功能性四聚寡糖具有调节肠道菌群、改善脂质代谢。提高身体免疫力的功效，同时该低聚寡糖具有降血糖、降血脂、增加胰岛素敏感性作用。

目前，水苏糖在分离纯化方面主要为离子交换树脂纯化和酶法制备水苏糖，但是使用离子交换树脂和酶法制备水苏糖，制备周期长而且成本较高，基于以上原因开发新型分离纯化工艺，寻找更加经济、高效、快捷的分离纯化技术，越来越多的成为研究者关注的焦点。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从地黄中分离水苏糖的方法，该方法操作简单，分离时间短，成本低，得到的产物纯度高，收率高。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种从地黄中分离水苏糖的方法，包括以下步骤：

1）将鲜地黄粗提物与水按1g：3～7ml的料液比，充分混匀后，得到上样液；

2）用氨丙基键合硅胶装填高压制备液相色谱柱后，将上样液上样于高压制备液相色谱柱，以乙腈-水系统为洗脱液，以10～200ml/min的速度恒流洗脱30～40min，所述洗脱液中乙腈与水的体积比为（68～73）：（27～32）；

3）在示差检测器检测下依据色谱出峰时间进行分段收集，在水苏糖对应峰开始上升时收集，当该峰下降至整个峰高的五分之一时结束收集，得到水苏糖液，将水苏糖液减压浓缩后干燥，得到高纯度水苏糖。

步骤2）所述的上样采用分次上样，每次上样10～20ml。

步骤3）所述的减压浓缩后干燥是将水苏糖液浓缩至相对密度为1.10～1.15后，在20～40℃下，真空干燥20～40h。

所述的氨丙基键合硅胶在使用前经过活化处理，首先，将小颗粒球型氨丙基键合硅胶与乙醇按1g：2～3ml的料液比，充分混匀后得到匀浆，将匀浆超声处理30～40min脱除气泡后，装填入色谱柱内；其次，用水泵抽吸液体至硅胶表面无液体为止后，加压至45～50bar，用高流速洗脱液，以200ml/min的流速，冲洗掉柱内的乙醇；最后，以100ml/min的流速，冲洗1h，得到活化后的氨丙基键合硅胶。

所述的加压是采用活塞进行分步加压，第一步加压到15～20bar，然后用高流速洗脱液冲洗柱子1h后，再加压到45～50bar。

所述的高流速洗脱液是乙腈与水按70:30的体积比配成的洗脱液。

所述的小颗粒球型氨丙基键合硅胶的粒径为5～20μm，孔径为

所述的高压制备液相色谱柱柱效降低后，用质量浓度为5%的氨水溶液进行洗脱再生，再生后用纯水进行洗脱，洗脱至流出液中无氨离子。

所述的示差检测器的内部温度设为30℃，外部温度设为35℃。

所述的鲜地黄粗提物是将鲜地黄洗净后，切片，加水浸提1～4h后，在80～100℃下，加热回流提取1～5h，将提取液过滤后，得滤液；向滤液中加入无水乙醇至乙醇含量达到90%后，在0～4℃下，静置10～14h后，在3000～4000r/min下，离心25～35min，得沉淀；将沉淀加水溶解后，用活性炭脱色后，将脱色液减压浓缩后，在25～30℃下，真空度达到0.09～0.15Mpa后，真空干燥20～40h，得到鲜地黄粗提物。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明将高压制备色谱分离首次应用到水苏糖的提取中，使用氨丙基键合硅胶作为柱填料，成功分离得到高纯度水苏糖，分离过程中只使用乙腈和水这一种色谱体系，进行恒流等速等梯度洗脱，采用示差检测器在线监测法分离产物和杂质，做到精确收集，分离过程简单快捷，一次分离就能达到目的，不需要任何化学处理方法，不会损失水苏糖，能直接、快速的分离得到水苏糖，且分离时间短，分离量大，收率达到85%以上，且得到的水苏糖纯度高达到98%以上。

本发明方法产生的废料少，柱效高，所需的洗脱液体积小，占地面积小，降低了整个工艺的消耗成本，填料及溶剂可回收利用，环境友好，适合工业化生产。

附图说明

图1为本发明分段收集地黄粗提物中各成分的HPLC色谱图；

图2为本发明分离得到的水苏糖的HPLC测定色图谱。

其中，1为葡萄糖，2为果糖，3为蔗糖，4为水苏糖，5为棉子糖。

具体实施方式