[发明专利]从瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法

说明书

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种从中药瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法。

背景技术

瓜蒌皮为葫芦科栝楼属植物栝楼（Trichosanthes kirilowii Marim.）或双边栝楼（Trichosanthes rosthornii Harms.）的干燥成熟果皮，属于常用中药，具有润肺化痰、利气宽胸等功效，临床上广泛用于治疗痰热咳嗽、痰浊黄稠、咽痛、胸痛、吐血、衄血、便秘、痈疮肿毒等症。现代药理实验及临床实践表明瓜蒌皮具有扩张冠状动脉、增加冠脉血流量、提高心肌耐缺氧能力、降低血清胆固醇、抗菌、抗癌等多种药理作用，尤其是对心血管疾病具有很好的治疗作用。

现已有文献报道从瓜蒌皮中提取纯化黄酮类成分的方法。刘岱琳[瓜蒌的抗血小板凝集活性成分研究，中草药，2004年12期]对瓜蒌皮的正丁醇部位的化学成分进行了分离，先用Sephadex LH-20柱色谱分离，再用反复硅胶柱色谱分离，氯仿-甲醇为洗脱剂，最终得到7种成分，其中包括1种黄酮类物质—香叶木素-7-O-β-葡萄糖苷。范雪梅[瓜蒌化学成分的分离与鉴定，沈阳药科大学学报，2011年12期]对瓜蒌皮的正丁醇部位的化学成分进行了分离，先后利用了硅胶、反相中低压、凝胶Sephadex LH-20柱色谱以及制备型高效液相色谱等分离手段，最终得到4种成分，其中包括1种黄酮类物质—柯伊利素-7-O-β-葡萄糖苷。

上述方法主要是对瓜蒌皮的正丁醇部位的化学成分进行系统的分离，得到的黄酮类物质的种类少，分离过程步骤较为繁琐，有时需要使用氯仿为萃取剂或洗脱剂，对人体和环境均有严重危害，而且生产周期较长，生产成本较高。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种操作简便、绿色环保、综合成本低、生产周期短的快速从中药瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法。

本发明的方案如下：

从中药瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法,步骤为：

（1）瓜蒌皮粗提物的制备：取粉碎好的瓜蒌皮药材，用乙醇-水溶液加热回流提取，提取液经减压回收至无醇后得到瓜蒌皮粗提物；

（2）萃取：将瓜蒌皮粗提物分散于水中，先后用等体积的石油醚、乙酸乙酯萃取，石油醚和乙酸乙酯层分别减压浓缩，得石油醚部位和乙酸乙酯部位；

（3）聚酰胺柱粗分离：将瓜蒌皮乙酸乙酯部位分散于水中，上聚酰胺柱进行层析，先用水进行洗脱，再用浓度为50%左右的乙醇-水溶液进行洗脱，最后用浓度为80%左右的乙醇-水溶液进行洗脱，收集80%左右的乙醇-水洗脱液，减压浓缩，得瓜蒌皮总黄酮苷元；

（4）半制备型高效液相色谱分离纯化：将瓜蒌皮总黄酮苷元用半制备型高效液相色谱进行分离纯化,色谱柱为YMC ODS-AQ柱（250 mm×10 mm I. D., 10 μm，大连江申分离科技有限公司），流动相为甲醇-水，检测波长为350 nm，收集目标组分馏分，将得到的馏分减压浓缩，即得到所要分离的单体化合物。 

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）加热回流提取时提取时间为1-3小时（优选为1.5-2.5小时，更加优选提取时间为2小时）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）提取次数为2-6次（优选提取次数为3-5次，更加优选4次）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（1）加热回流提取时所用乙醇的质量浓度为50%-95%（优选60%-80%，更优选70%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（3）洗脱液为60%-95%的乙醇-水洗脱液（优选70%-90%，更优选80%）。

前面所述的方法，优选的方案是，步骤（4）用甲醇-水洗脱液进行洗脱时，洗脱方式有70%甲醇-水等度洗脱、65%甲醇-水等度洗脱、60%甲醇-水等度洗脱或甲醇-水梯度洗脱。优选的是，控制甲醇-水洗脱液的流速为2.5-4.5 mL/min（优选3.5 mL/min）。

本发明从中药瓜蒌皮中分离纯化木犀草素、芹菜素和香叶木素的方法，首先采用聚酰胺柱粗分离，再用半制备型高效液相色谱法进行分离纯化，所得目标化合物纯度高，杂质含量极低。除此之外，还具有如下优势：

（1）提取物经过聚酰胺柱粗分离后可以除去大部分的杂质，使混合物的组成得到简化，可以为后续的分离工作降低难度，并且可以保护半制备型高效液相色谱柱不被污染，有效地延长了色谱柱的使用寿命。