[发明专利]一种胰高血糖素样肽-1生物学活性检测试剂及检测方法和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物检测试剂，尤其是一种胰高血糖素样肽-1(GLP-1)生物学活性检测试剂及检测方法和试剂盒。

背景技术

糖尿病是在多基因遗传基础上，加上环境因素、自身免疫的作用，通过未完全阐明的机制，引起胰岛素的分泌障碍和胰岛素生物学效应不足，导致以高血糖症为基本生化特点的糖、脂肪、蛋白质、水电解质代谢紊乱的一组临床综合征。典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等“三多一少”症状，其慢性并发症主要是特异和非特异的微血管病变、末梢神经病变。目前糖尿病已成为继肿瘤及心脑血管疾病后第3位主要的非传染性疾病，WHO预测到2030年全世界糖尿病患者将超过3.6亿。糖尿病治疗主要围绕如何控制血糖升高，而现有纠正高血糖治疗措施并不能纠正糖尿病原发病理生理改变即β细胞功能缺陷。近年研究发现，2型糖尿病患者肠促胰岛素激素对胰岛素的刺激作用明显降低，其原因可能是肠促胰岛素激素的浓度低或作用抵抗。因此，GLP-1将成为2型糖尿病治疗重要环节。

GLP-1是由末端空肠、回肠和结肠的Langerhans细胞（L细胞）分泌的一种由30个氨基酸组成的短肽激素，是胰高血糖素原基因转录翻译后的产物。肠腔内营养物质如糖、脂肪等可直接刺激肠腔分泌GLP-1。GLP-1基因表达具有组织特异性，主要表达在胰腺胰岛细胞、小肠的L细胞以及下丘脑。人体内有活性的GLP-1有两种形式，分别为GLP-1（7-36）NH2和GLP-l（7-37）NH2，其中血循环中80％以上为GLP-l（7-36）NH2。在人体内GLP-1能被二肽酰基肽酶特异性识别，导致GLP-1在血浆中的半衰期短于2min，这一降解过程主要是在肝脏完成，最后通过肾脏排泄；同时，在正常生理状态下肾外组织协助肾脏清除GLP-l。GLP-1通过与GLP-1受体结合后发挥葡萄糖依赖性的促胰岛素分泌作用，即高血糖时才能发挥作用，这种生理特性使GLP-1具有不会造成低血糖的优势。GLP-1能够促进胰岛素的分泌，刺激胰岛β细胞增殖分化、抑制β细胞凋亡，从而起到保护胰岛β细胞的作用。此外，GLP-1还对心血管具有保护作用，并且能够营养神经细胞。

由于GLP-1在控制和调控血糖中的重要地位，且其降糖作用依赖于血糖浓度，通过这样途径控制血糖不存在导致低血糖的风险，为此，药学领域的专家已经开发GLP-1的类似物，如：艾塞那肽，利拉鲁肽等。检测患者血浆中GLP-1水平，可指导临床正确使用GLP-1类似物。

然而，国内外检测GLP-1主要是通过酶联免疫吸附试验和化学发光免疫测定技术，目前国内尚不能生产临床实用商品化试剂，进口试剂盒不但价格昂贵、检测成本高，而且操作繁琐。同时，基于免疫学原理建立的测定方法，只能测定GLP-1免疫活性，而不能测定其生物活性，但GLP-1在体内以生物活性发挥生理和病理作用。而且，目前GLP-1检测试剂盒灵敏度低，只能用于科研而不适用于临床检验的缺陷。

通过检索，发现与本发明专利申请相关的如下专利公开文献：

1、人胰高血糖素样肽-1调节剂及其在治疗糖尿病和相关病症中的用途（CN101400699），本发明提供新的人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)-受体调节剂，其具有类似于或优于天然GLP-1肽的生物活性，因而可用于治疗或预防与GLP活性相关的疾病或病症。此外，本发明提供新的化学修饰的化合物，其不但在II型糖尿病中刺激胰岛素的分泌，而且还产生其它有益的促胰岛素响应。这些合成的肽GLP-1受体调节剂对溶蛋白性裂解表现出提高的稳定性，这使其成为理想的用于口服或肠胃外给药的治疗候选物。本发明的化合物在糖尿病的功效模型中显示出期望的药物动力学性质和期望的效能。

2、胰高血糖素样肽-1衍生物及其制药用途（CN101868476A），本发明的GLP-1衍生物包含修饰的GLP-1(7-37)序列，其具有总共2-12个氨基酸修饰，包括Glu22和Arg26，在18、20、23、30、31、34、36、37或39位被白蛋白结合残基衍生化或PEG化。这些化合物可用于治疗或预防2型糖尿病和相关疾病。所述化合物是有效的、稳定的，具有长半衰期、结合白蛋白的高亲和力和/或结合GLP-1受体(GLP-1R)的胞外结构域的高亲和力，所有这些都与获得长效的、稳定的且有活性的并有可能每周给予1次的GLP-1衍生物的总体目标潜在相关。