[发明专利]羊胚胎中提取RNA的方法

权利要求书

1.一种羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于按下述步骤进行：第一步，取100枚至500枚羊胚胎移入离心管中，在离心管中加入0.2ml氯仿，振荡15s后静置2分钟；第二步，将静置后离心管中的混合液在温度为4℃、转速为12000rpm的离心机中离心15分钟后得到上清液，在上清液中分别加入0.5ml异丙醇、5μg至10μg RNase-free糖原并混匀得到上清混合液；第三步,将上清混合液在温度为-20℃下放置8h至10h，然后在温度为4℃、转速为12000rpm的离心机中离心10分钟后取沉淀，在沉淀中加入1ml 体积百分比浓度为75%的乙醇溶液进行洗涤，洗涤后在温度为4℃、转速为7500rpm的离心机中离心5分钟后取沉淀，在沉淀中加入20微升至50微升的DEPC H₂O溶解后得到RNA。

2.根据权利要求1所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于羊胚胎为新鲜羊胚胎或者羊胚胎为冷冻保存解冻后的羊胚胎。

3.根据权利要求2所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于第一步中，取100枚至500枚新鲜羊胚胎将其移入500微升至1毫升的DPBS缓冲液中洗涤3遍，然后将洗涤后的新鲜羊胚胎移入离心管中。

4.根据权利要求2或3所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于冷冻保存解冻后的羊胚胎按下述步骤得到：第一步，取100枚至500枚新鲜羊胚胎移入500微升至1毫升的DPBS缓冲液中洗涤3遍；第二步，用吸管将洗涤后的羊胚胎移入离心管中；第三步，在离心管中加入1毫升的Trizol并混匀，在室温下放置5分钟至10分钟后置于液氮中速冻5分钟，然后置于温度为-70℃至-100℃下保存，提取RNA时，将在温度为-70℃至-100℃下保存的羊胚胎放置在常温下自然解冻后置于冰上稳定1分钟至2分钟后得到解冻后的羊胚胎；或者第三步，在离心管中加入1毫升的RNA保护液并混匀，在温度为4℃至10℃下放置30分钟，然后置于温度为-20℃至-30℃下保存，提取RNA时，将在温度为-20℃至-30℃下保存的羊胚胎放置在常温下自然解冻后稳定2分钟至5分钟，然后在温度为4℃、转速为5000rpm的离心机中离心5分钟后得到沉淀，在沉淀中加入1mL Trizol混匀并置于冰上5分钟后得到解冻后的羊胚胎。

5.根据权利要求2或3或4所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于新鲜羊胚胎为从羊体外发育液中取出的新鲜羊胚胎；或者新鲜羊胚胎为用温度为37℃至38℃的冲卵液从羊体内冲出的新鲜羊胚胎。

6.根据权利要求1或2或3或4或5所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于离心管为1.5毫升的离心管。

7.根据权利要求1或2或3或4或5或6所述的羊胚胎中提取RNA的方法，其特征在于离心管为无RNase、无DNase的离心管。