[发明专利]羊胚胎中提取RNA的方法

说明书

技术领域

本发明涉及RNA提取技术领域，是一种羊胚胎中提取RNA的方法。

背景技术

目前关于胚胎发育学的研究越来越受到重视，而从RNA水平上或者说从转录组水平上研究已成为胚胎发育学研究的重点。从胚胎中提取RNA的方法主要有两种，一种为采用微量提取试剂盒进行抽提，此种方法效率高、所需胚胎量少，所以一直被大家所称赞。但是微量抽提试剂盒都是利用过柱法提取RNA，这种方法所得到RNA会有一定的损失，影响后续试验（比如说不能用于miRNA高通量测序试验），并且试剂盒价格都比较昂贵。另外一种为普通RNA提取方法（利用Trizol），此种方法在组织或者其他样品中抽提效率比较高，在胚胎中应用受到限制，因它所需胚胎量比较多，而胚胎通常都比较珍贵，数量较少。但是此种方法所提出的RNA不影响后续的实验，因此如果后续试验对RNA要求比较高的情况下，只能选择Trizol提取方法。

发明内容

本发明提供了一种羊胚胎中提取RNA的方法，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有RNA提取方法在提取过程中RNA有损失影响后续试验而造成应用受限、所需胚胎量多和成产成本高的问题。

本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种羊胚胎中提取RNA的方法，按下述步骤进行：第一步，取100枚至500枚羊胚胎移入离心管中，在离心管中加入0.2ml氯仿，振荡15s后静置2分钟；第二步，将静置后离心管中的混合液在温度为4℃、转速为12000rpm的离心机中离心15分钟后得到上清液，在上清液中分别加入0.5ml异丙醇、5μg至10μg RNase-free糖原并混匀得到上清混合液；第三步，将上清混合液在温度为-20℃下放置8h至10h，然后在温度为4℃、转速为12000rpm的离心机中离心10分钟后取沉淀，在沉淀中加入1ml 体积百分比浓度为75%的乙醇溶液进行洗涤，洗涤后在温度为4℃、转速为7500rpm的离心机中离心5分钟后取沉淀，在沉淀中加入20微升至50微升的DEPC H₂O溶解后得到RNA。

下面是对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：

上述羊胚胎为新鲜羊胚胎或者羊胚胎为冷冻保存解冻后的羊胚胎。

上述第一步中，取100枚至500枚新鲜羊胚胎将其移入500微升至1毫升的DPBS缓冲液中洗涤3遍，然后将洗涤后的新鲜羊胚胎移入离心管中。

上述冷冻保存解冻后的羊胚胎按下述步骤得到：第一步，取100枚至500枚新鲜羊胚胎移入500微升至1毫升的DPBS缓冲液中洗涤3遍；第二步，用吸管将洗涤后的羊胚胎移入离心管中；第三步，在离心管中加入1毫升的Trizol并混匀，在室温下放置5分钟至10分钟后置于液氮中速冻5分钟，然后置于温度为-70℃至-100℃下保存，提取RNA时，将在温度为-70℃至-100℃下保存的羊胚胎放置在常温下自然解冻后置于冰上稳定1分钟至2分钟后得到解冻后的羊胚胎；或者第三步，在离心管中加入1毫升的RNA保护液并混匀，在温度为4℃至10℃下放置30分钟，然后置于温度为-20℃至-30℃下保存，提取RNA时，将在温度为-20℃至-30℃下保存的羊胚胎放置在常温下自然解冻后稳定2分钟至5分钟，然后在温度为4℃、转速为5000rpm的离心机中离心5分钟后得到沉淀，在沉淀中加入1mL Trizol混匀并置于冰上5分钟后得到解冻后的羊胚胎。

上述新鲜羊胚胎为从羊体外发育液中取出的新鲜羊胚胎；或者新鲜羊胚胎为用温度为37℃至38℃的冲卵液从羊体内冲出的新鲜羊胚胎。

上述离心管为1.5毫升的离心管。

上述离心管为无RNase、无DNase的离心管。

本发明工艺简单，同样数量的羊胚胎提取的RNA较现有技术同样数量的羊胚胎提取的RNA的量有很大的提高，且在提取过程中无RNA损失，提取RNA的羊胚胎可为新鲜羊胚胎或冷冻保存解冻后的羊胚胎，从而降低了生产成本，提高了提取效率。

具体实施方式

本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。