[发明专利]酮还原酶LEK、编码基因、突变体及应用

权利要求书

1.一种酮还原酶LEK，其特征在于所述酮还原酶LEK具有SEQ.ID.NO.2所示氨基酸序列95%以上同源性。

2.如权利要求1所述酮还原酶LEK，其特征在于所述酮还原酶LEK的氨基酸序列为SEQ.ID.NO.2所示。

3.一种权利要求1所述酮还原酶LEK的编码基因，其特征在于所述基因具有SEQ.ID.NO.1所示核苷酸序列90%以上同源性。

4.如权利要求3所述酮还原酶LEK的编码基因，其特征在于所述基因的核苷酸序列为SEQ.ID.NO.1所示。

5.一种由权利要求1所述酮还原酶LEK获得的突变体，其特征在于所述酮还原酶LEK突变体是将酮还原酶LEK氨基酸序列中第28位的W突变为A获得突变体W28A。

6.一种权利要求5所述由酮还原酶LEK获得的突变体在生物催化制备（R）-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述的应用为：以酮还原酶LEK突变体发酵培养后的湿菌体和葡萄糖脱氢酶GDH2发酵培养后的湿菌体以质量比1：0.6～0.8的混合菌体为催化剂，以4-氯乙酰乙酸乙酯为底物，在葡萄糖的作用下，于无水乙醇和磷酸盐缓冲液中构成转化体系，在30℃、180rpm条件下进行转化反应，反应完全后将反应液用等体积的乙酸乙酯萃取，取上层有机相用无水硫酸钠脱水后用旋转蒸发器蒸干，再用异丙醇溶解，经滤膜过滤，获得所述（R）-4-氯-3-羟基丁酸乙酯；所述催化剂的质量用量以酮还原酶LEK突变体发酵培养后的湿菌体质量计为16.00～18.00g/L反应体系，所述底物初始浓度为8.00～18.30g/L反应体系，所述葡萄糖用量为17.00～18.00g/L反应体系，所述无水乙醇的体积终浓度为7～15%。

7.如权利要求5所述由酮还原酶LEK获得的突变体在生物催化制备（R）-4-氯-3-羟基丁酸乙酯中的应用，其特征在于所述酮还原酶LEK突变体发酵培养后的湿菌体按如下方法制备：将酮还原酶LEK突变体W28A菌株接种至LB培养基中，37℃下培养过夜，取菌液以体积浓度1%的接种量转接到含100μg/mL氨苄青霉素的LB液体培养基中，37℃、180r/min震荡培养至菌液OD₆₀₀值为0.4～0.6，再加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L，于25℃、140r/min诱导表达12～17h，将诱导培养液离心，收集湿菌体，即获得所述酮还原酶LEK突变体W28A发酵培养后的湿菌体。