[发明专利]重组共表达维生素K环氧化物还原酶亚基1以提高依赖维生素K的蛋白质表达

说明书

本申请是申请日为2006年1月27日、申请号为200680004712.4(PCT/EP2006/000734)的发明专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及一种宿主生物体，其含有编码维生素K还原酶复合体亚基1(VKORC1)的重组核酸和编码依赖于维生素K的(VKD)蛋白质的重组核酸，其中重组VKORC1和重组VKD蛋白质在所述宿主生物体中都得到表达。本发明还涉及一种包含细胞的细胞培养系统，该细胞含有所述重组核酸。本发明还涉及一种提高在宿主生物体中表达重组VKD蛋白质的生产率的方法，该宿主生物体在合适的体系中进行培养。

背景技术

维生素K环氧化物还原酶复合体(VKORC)重复利用还原形式的维生素K，该维生素K形式是依赖于维生素K的(VKD)蛋白质翻译后γ-羧基化必需的辅助因子(Nelsestuen，G.L.，Zytkovicz，T.H.，& Howard，J.B.(1974)The mode of action of vitamin K Identification of gamma-carboxyglutamic acid as a component ofprothrombin.J.Biol.Chem.，249，6347-6350)。最近，VKORC1基因得到了鉴定，并且被Rost等于2004年进行了详细描述(Rost，S.，Fregin，A.，Ivaskevicius，V.，Conzelmann，E.，Hortnagel，K.，PeIz，H.J.，Lappegard，K.，Seifried，E.，Scharrer，I.，Tuddenham，E.G.，Muller，C.R.，Strom，T.M.，&Oldenburg，J.(2004)Mutations in VKORC1cause warfarin resistance and multiple coagulation factor deficiency type2.Nature，427，537-541)。

VKD蛋白质含有γ-羧基化谷氨酸(gla)残基，该残基表现出特异的生物化学和生理学特性，类似于依赖于Ca的结合凝血因子带负电磷脂膜的特性(Mann，K.G.，Jenny，R.J.，& Krishnaswamy，S.(1988)Cofactor proteins in the assembly and expression of blood clotting enzyme complexes.Annu.Rev.Biochem.，57，915-956)。VKD蛋白质包括促凝血的因子II、VII和X，以及抗凝血的蛋白质C、S和Z。虽然限定为一种单独的已知酶促反应，但在所有哺乳动物组织中都发现有γ-羧化酶活性(Vermeer，C.& de Boer-van den Berg MA(1985)Vitamin K-dependent carboxylase.Haematologia(Budap)，18，71-97)。γ-羧化酶使用还原的维生素K作为辅助因子来催化羧基化反应。