[发明专利]一种具有免疫调节作用的新型海胆黄多糖的制备方法及结构鉴定

权利要求书

1.一种具有α-1，4-葡聚糖主链的海胆黄多糖，其特征在于所述多糖的重复结构单元中含有1→4和1→3两种糖苷键，其中主链为1→4糖苷键，侧链由1→3糖苷键组成，糖残基为α构型，其相对分子量为6.78×10⁵Da，比旋度其为首次从烟台光棘球海胆中分离得到的一种结构新颖的葡聚糖。 

2.权利要求1所述的海胆黄多糖具有主链由α-1，4-糖苷键组成，侧链由α-1，3-糖苷键组成的重复单元结构，所述的重复结构单元结构如下所示。 

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3.根据权利要求1所述的海胆黄多糖的制备方法，其特征在于按如下步骤实现： 

(1)将新鲜的海胆切开，小心剥离海胆黄，纱布过滤除去海胆黄中的水分，向海胆黄中加入等体积的丙酮进行脱脂处理，得海胆黄多糖丙酮粉；海胆黄丙酮粉经90℃热水反复提取后，分别使用木瓜蛋白酶和Sevage法除去提取液中的蛋白质，55℃减压蒸馏除去有机试剂并浓缩提取液； 

(2)向上述提取液中缓慢加入4倍体积预冷至4℃的无水乙醇，并在4℃下静置过夜沉淀多糖，5000rpm，10min离心收集沉淀，用无水乙醇洗涤沉淀3次，将沉淀重新溶解于热水后冷冻干燥，得到海胆黄粗多糖； 

(3)将上述粗多糖配成50mg/mL的水溶液，过0.45μm滤膜滤后经过DEAE-52纤维素离子交换柱分离，蒸馏水洗脱，流速0.5mL/min，每管5mL分部收集，苯酚-硫酸法逐管测定糖含量，绘制洗脱曲线，收集第8～17管，合并后冷冻干燥得到多糖CP； 

(4)取上述多糖CP30mg，溶于1mL(0.05mol/L)NaCl溶液中，0.22μm滤膜过滤后，经Sephacryl S-400柱层析分离，0.05mol/L的NaCl溶液洗脱，流速0.5mL/min，每管3mL分部收集，硫酸-苯酚法逐管检测糖含量，绘制洗脱曲线，收集第10～20管，透析除盐后，冷冻干燥，得海胆黄多糖。 

4.权利要求1所述海胆黄多糖的用途。 

5.权利要求4所述的用途，包括在制备免疫调节剂及抗肿瘤辅助药物中的应用。 

6.权利要求5所述，优先保护在制备免疫调节剂中的应用。