[发明专利]一种具有免疫调节作用的新型海胆黄多糖的制备方法及结构鉴定

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种具有α-1，4糖苷键主链和α-1，3糖苷键侧链的海胆黄多糖及其制备方法和用途；属于天然高分子领域。

背景技术

雌性海胆的生殖腺即海胆黄为名贵的海产珍品，被称为“云丹”，国际市场上价格昂贵，有“黄色钻石”之称。海胆黄含有丰富的蛋白质，多糖，脂肪酸，维生素及各种微量元素等多种对人体有益的营养成分。因此海胆黄不仅具有较高的食用价值，同时还具有极好的药用价值，尤其在增强人体免疫力，防治心血管疾病方面有较好的效果。应用海胆治疗各种肿毒的方法在传统医学中早有记载。随着科技的进步，海胆的抗肿瘤作用已经得到了当今医学的肯定。

国外对海胆的研究始于上世纪60年代，早期的研究主要集中在对海胆棘色素及海胆内生或共生菌代谢产物方面的研究。1981年，George首次从有毒的绿海胆(S.droebachiensis)中分离得到两种具有抗肿瘤活性的糖蛋白。自此开始，越来越多的学者从不同种类的海胆的外壳，内脏，卵等来源中发现了多种具有抗肿瘤，免疫调节等不同生物活性的多糖，糖蛋白，糖脂等化合物。

我国是海胆资源比较丰富的国家，而多糖是海胆黄中重要的营养成分。通过人们对药用多糖作用机制的研究发现，从天然产物中分离得到的多糖发挥抗肿瘤等生理活性，往往是通过多糖分子作为免疫调节剂而发挥作用的。多糖不仅仅能够激活多种免疫细胞，同时对正常的机体细胞没有毒副作用，因而作为一种加强生物免疫反应或抗体生成及激活的免疫调节剂应用于癌症和免疫缺损疾病的临床治疗方面具有巨大的研究潜力。相应地，多糖的研究范围也不断扩大，不仅仅包括了多糖的分离纯化、结构分析的研究，也逐渐发展到了多糖的构效关系，作用机制，临床应用等方面。随着研究的不断深入，多糖化合物吸引了越来越多学者的注意，其生物活性的研究得到了飞速发展。

发明内容

本发明的目的是从烟台光棘球海胆的生殖腺中提取出一种多糖，鉴定其化学结构并确定其具体的活性用途。

本发明涉及海胆黄多糖结构的鉴定，即从光棘球海胆黄中分离得到的海胆黄多糖，经单糖组成分析结果表明，海胆黄多糖为一种葡聚糖，通过化学分析和光谱分析推断出本发明中海胆黄多糖的重复单元结构如图1所示，主链由1→4糖苷键组成，侧链由1→3糖苷键组成，糖苷键残基为α构型。表明本发明所涉及的海胆黄多糖是从烟台光棘球海胆中首次分离得到的一种结构新颖的葡聚糖。

上述海胆黄多糖在200-800μg/mL时对脾淋巴细胞有明显的增殖作用，并且呈一定的剂量依赖性。另外海胆黄多糖可显著促进小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力，在100-400μg/mL浓度范围内，与对照组相比有显著性差异(P＜0.05)，并且可以显著地刺激小鼠腹腔巨噬细胞RAW264.7增殖。

附图说明

图1是海胆黄多糖的重复单元

图2是海胆黄多糖分离提取流程图

图3是海胆黄多糖高效液相(HPLC)色谱图

图4是海胆黄多糖水解产物薄层层析图

图5是海胆黄多糖的糖醇乙酸酯的气相(GC)色谱图

图6是NaIO₄溶液的浓度-吸光值标准曲线

图7是海胆黄多糖的Smith降解产物的气相色谱图

图8是海胆黄多糖完全甲基化后的红外谱图

图9是完全甲基化的海胆黄多糖的糖醇乙酸酯GC-MS联机分析中的气相(GC)色谱图

图10是海胆黄多糖部分酸水解后的糖醇乙酸酯的气相(GC)色谱图

图11是海胆黄多糖紫外分光图谱

图12是海胆黄多糖红外分光图谱

图13是海胆黄多糖的¹HNMR图谱

图14是海胆黄多糖的¹³CNMR图谱

图15是海胆黄多糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖作用图

图16是海胆黄多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖作用图

图17是海胆黄多糖对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的影响图

具体实施方式

实施例1

一、提取流程

将新鲜的海胆切开，小心剥离海胆黄，纱布过滤除去海胆黄中的水分。向收集到的500g海胆黄中加入等体积的丙酮，搅拌使之与丙酮充分接触，静置30min，弃上层丙酮，反复数次至丙酮层基本无色为止，最后将丙酮减压挥干，得海胆黄多糖丙酮粉200g。海胆黄丙酮粉置于2L蒸馏水中，90℃提取5小时，反复3次，得水提液共6L，50℃减压浓缩至1.2L。