[发明专利]一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法

说明书

技术领域

本发明涉及酶解效果测定技术领域，具体涉及一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法。

背景技术

现在酶制剂产品在饲料中的使用越来越广泛，而饲用非淀粉多糖酶是指作用于饲料原料中所有抗营养因子的各种单酶的总称，包括：木聚糖酶、β-葡聚糖酶、纤维素酶、β-甘露聚糖酶、果胶酶等。研究发现在动物饲料中添加饲用非淀粉多糖酶，可降解饲料中的非淀粉多糖，提高能量、蛋白质、氨基酸等养分的消化利用率、改善饲料的营养价值。

不同的酶制剂其酶活性及其酶解效果不尽相同，目前通常用酶活性来表征酶解效果的好坏。酶活性的通用定义为：在一定的PH、温度下，一定时间内分解一定底物的量或生成一定产物的量所需的酶量；因此，酶活的真实含义即是“酶作用的结果”，即底物的减少量或产物的增加量，而不是含酶的多少。但是，现在“酶活性”这个指标并不适合用来表示饲用非淀粉多糖酶的酶解效果，而且用现有的酶活性测定方法来比较不同饲用非淀粉多糖酶酶制剂的酶解效果也并不准确。

首先，所有酶制剂均具有专一性，即一种酶只与一种相对应的底物发生作用。酶活性检测的底物与饲用酶制剂在饲料中发挥作用的底物差异非常大。检测酶活所用的底物均溶于水，是这一大类底物中的极少种类；而饲料中的非淀粉多糖绝大部份为非水溶的。因此酶活检测的结果不能代表饲用非淀粉多糖酶在饲料中的作用大小。如木聚糖酶：检测木聚糖酶酶活的底物叫燕麦木聚糖和桦木木聚糖。这两种木聚糖都是溶于水的，而饲料原料中的木聚糖绝大部分是不溶于水的，且木聚糖的种类多而复杂。

其次，非淀粉多糖酶在对饲料中的非淀粉多糖降解过程中彼此之间具有极强的协同性，现有的酶活性检测方法不能体现出非淀粉多糖酶的协同性。

最后，因为不同生产厂家的酶活定义不同，不同生产厂家的酶活值不能简单比较其大小，更不能体现效果差异；而且现有的酶活性检测方法不方便，检测成本高，除了饲用酶制剂生产厂家能够检测酶活外，全国的饲用酶制剂第三方检测机构仅有三家，而绝大部分使用厂家自身不具备检测饲用非淀粉多糖酶酶活的条件，因此使用厂家要进行不同生产企业的饲用非淀粉多糖酶之间的比较选择非常困难。

发明内容

本发明的目的是提供一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，本方法操作简单，成本较低，测定结果准确，而且能够直观地反应出不同饲用非淀粉多糖酶的酶解效果。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：一种体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，包括以下步骤：

（1）称取等质量的饲料样品分别加入两个锥形瓶中，然后向两个锥形瓶中分别加入pH为5.0，浓度为0.1mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液，其中饲料样品与乙酸-乙酸钠缓冲液的质量比为1:5；

（2）向其中一个锥形瓶中加入饲用非淀粉多糖酶，此锥形瓶即为实验组，未加入饲用非淀粉多糖酶的锥形瓶即为对照组；将实验组和对照组中溶液搅拌均匀后，封住瓶口并放到水浴摇床里，35～45℃下反应4-6h；

（3）向步骤（2）酶解结束的实验组和对照组中分别加入质量分数为10%的三氯乙酸溶液5ml，摇匀，静置10min，过滤后，用蒸馏水重复清洗滤渣，直到滤液澄清；

（4）将步骤（3）所制得的滤渣，烘干，直到滤渣重量恒定后，称取滤渣重量；

（5）根据步骤（4）所得到的实验组和对照组的滤渣重量，计算酶解率，酶解率的计算公式为：酶解率=[（饲料样品重量-实验组滤渣重量）-（饲料样品重量-对照组滤渣重量）]/饲料样品重量×100％。

所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中的酶解温度为40℃，酶解时间为5h。

所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中的搅拌时间为30min。

所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（2）中酶解过程中每隔30min振荡一次，速度为100r/min。

所述的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法，步骤（4）中烘干是将滤渣放置于烘箱中105℃烘干。

本发明所提供的体外测定饲用非淀粉多糖酶酶解效果的方法适用于对非淀粉多糖酶的单酶和相同酶种的复合非淀粉多糖酶的效果比较，本发明所使用的条件与饲用非淀粉多糖酶在畜禽体内发挥作用的条件基本相同，最重要的是饲用非淀粉多糖酶在本方法中作用的底物与在畜禽体内作用的底物是完全相同。