[发明专利]具有肾素和ACE双重抑制活性的小肽及应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及具有肾素和ACE双重抑制活性的小肽、其制备方法及应用。

背景技术

肾素-血管紧张素系统（RAS）对机体血压和体液平衡的调节具有重要作用，RAS系统失衡会导致机体血压升高，进而导致相关慢性疾病如心脑血管疾病、慢性肾病和糖尿病等发病率的升高。抑制RAS系统中的2个关键水解酶肾素和血管紧张素转化酶-                                                （ACE），能够有效阻断RAS系统。另一方面，临床研究发现，长期使用ACE抑制剂例如卡托普利（Captopril）还会导致血管紧张素-（Ang-I）的堆积，激活旁路途径，将大量Ang-I重新转化成血管紧张素-Ⅱ（Ang-Ⅱ），发生‘Ang-Ⅱ逃逸’的现象，严重影响高血压病的治疗。近年来，新研制的肾素抑制剂阿利吉仑在临床应用中表现出了较好的降血压效果和对相关机体组织的保护作用，然而也存在头晕、头痛等不良反应。鉴于单独使用ACE抑制剂和肾素抑制剂中存在的问题，研究人员尝试联合使用不同功能的抑制剂，发现联合肾素抑制剂和ACE抑制剂，不仅可以降低机体血压，还有助于减少-型糖尿病患者肾功能的损伤。但是，现有技术中缺少同时具有肾素和ACE双重抑制活性的物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种具有肾素和ACE双重抑制活性的小肽。

本发明的另一目的是提供具有肾素和ACE双重抑制活性的小肽的制备方法，该方法简单，由于原料来源于菜籽粕，所以对人体安全。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种具有肾素和ACE双重抑制活性的小肽，氨基酸序列为Leu-Tyr。

一种上述小肽的制备方法，

（1）将菜籽粕粉碎，分散于蒸馏水中，用碱液调节pH值为10.5-11.5，并维持pH值不变，搅拌1-2 h，离心后分离上清液和沉淀，所述上清液为菜籽蛋白粗提液，所述沉淀为残渣；调节所述菜籽蛋白粗提液的pH为4-5，静置后离心取沉淀，即得菜籽蛋白粗提物；

（2）将所述菜籽蛋白粗提物用蛋白酶 Alcalase水解，得到菜籽蛋白水解物；

（3）将所述菜籽蛋白水解物采用高效液相色谱分离，得到所述小肽。

将步骤（1）中所述菜籽粕分散于蒸馏水中，用碱液调节pH 为10.5-11.5，并维持pH不变，搅拌，离心后取上清液，所述上清液为菜籽蛋白粗提液。

步骤（2）所述水解的具体方法为：将菜籽蛋白粗提物冷冻干燥后溶于水，调节pH为7.5-8.5，加入蛋白酶Alcalase，在45-55℃条件下进行水解反应。

步骤（3）的具体方法为：将所述菜籽蛋白水解物依次采用Jupiter C12 色谱柱和Vydac C18色谱柱进行分离，得到所述小肽。

将所述菜籽蛋白水解物采用Jupiter C12 色谱柱分离的具体方法为：

将菜籽蛋白水解物上样于Jupiter C12 色谱柱，用流动相A和B进行洗脱，洗脱程序：0～35 min，流动相B 5～80%线性升高，流动相A 95～20%线性降低，收集对应于流动相B体积浓度为60-70%时的洗脱液F5；

将洗脱液F5再次采用Jupiter C12 色谱柱分离，用流动相A和B进行洗脱，洗脱程序为： 0～40 min，流动相A 35～30%线性降低，流动相B 65～70%线性升高，收集对应于流动相B体积浓度为67-68%时的洗脱液F5-F；

所述流动相A：质量百分浓度为0.05-0.2%三氟乙酸的水溶液；所述流动相B：质量百分浓度为0.05-0.2%三氟乙酸的甲醇溶液。

将所述洗脱液F5-F采用Vydac C18色谱柱进行分离的具体方法为：采用流动相A和B进行洗脱，收集对应于流动相B体积浓度为16.5-18.0%时的洗脱液，即得所述小肽；所述流动相A：质量百分浓度为0.05-0.2%三氟乙酸的水溶液；所述流动相B：质量百分浓度为0.05-0.2%三氟乙酸的甲醇溶液；所述洗脱程序：0～60 min，流动相A 95～70%线性降低，流动相B 5-30%线性升高。

一种所述具有肾素和ACE抑制活性的小肽在制备降血压药物或具有降血压功能的食品中的应用。

一种降血压药物组合物，含有氨基酸序列为Leu-Tyr的小肽。

一种具有降血压功能的食品，含有氨基酸序列为Leu-Tyr的小肽。

有益效果：