[发明专利]建立单克隆间充质干细胞的方法及其应用

权利要求书

1.一种分离间充质干细胞的方法，其特征在于，包括：

A)利用胶原酶对动物样本进行消化，以便分散所述动物样本中所包含的细胞，以便获得包含干细胞的细胞混合物；

B)利用液体培养基对所述细胞混合物进行培养；将构建体引入所述培养获得的贴壁细胞中，其中，所述构建体包括编码报告蛋白的核酸分子以及间充质干细胞特异性启动子，所述编码报告蛋白的核酸分子与间充质干细胞特异性启动子可操纵地相连，以便在间充质干细胞中表达所述报告蛋白；所述间充质干细胞特异性启动子为人NANOG启动子，其基因序列如SEQ ID NO:1所示；以及

C)利用FACS，分选获得表达所述报告蛋白的间充质干细胞，其中，所述间充质干细胞呈单个细胞的形式。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物样本为来自选自肝脏组织、脂肪组织、骨实质、肌肉、脐带血、脐带、胎盘、外周血、胰腺、肺脏、经血和牙髓的至少一种。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述动物样本为来自胎儿肝脏组织及成人骨髓。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液体培养基为α-MEM培养基。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述报告蛋白为选自发光蛋白、荧光蛋白、酶的至少一种。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述报告蛋白为绿色荧光蛋白。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述构建体呈质粒、噬菌体、人工染色体、粘粒、病毒的至少一种的形式。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进一步包括对所得到的单个细胞形式的间充质干细胞进行培养，以便获得干细胞单克隆集群。