[发明专利]转基因成分MLPA检测的探针及制备其长探针的引物

说明书

技术领域

本申请涉及核酸分子检测领域，特别是涉及一种用于转基因成分的MLPA检测的探针，制备该探针引物，以及该探针的应用。

背景技术

多重连接依赖探针扩增技术(MLPA:multiplex ligated-probes amplification)由荷兰的Dr．Schouten JP于2002年报道。MLPA检测首先要设计和制备检测各基因位点的上下游探针；其次进行MLPA反应，该反应由连续三个步骤组成：即样品DNA与探针杂交复性、连接酶连接反应和连接产物PCR扩增；最后所得MLPA扩增产物一般由测序仪或毛细管进行电泳分离和分析。

MLPA检测最初应用于医学检测目的。该技术可以不需昂贵设备、特异性高，在医学检测时单管可检测多达40多个基因或位点。MLPA法于2002年发明以来，MLPA探针设计和制备、反应体系建立和反应条件等均已相当的成熟。已广泛应用于染色体异常、基因点突变、基因缺失、基因甲基化、癌基因突变及mRNA表达研究等领域，公司MRC-Holland b.v.已开发了135种检测人类遗传和肿瘤基因的试剂盒。然而，在转基因检测方面国外仅见Francisco Moreano2005年等对转基因大豆和玉米的可行性研究，国内外尚未有转基因成分检测的MLPA探针及方法，也未见形成检测试剂盒的报道。因而开展高通量的转基因成分MLPA检测研究具重要现实意义。

发明内容

本申请的目的是提供一种新的转基因玉米品系MLPA检测的探针及其应用。

本申请的另一目的是提供一种适用于不对称PCR方法制备长探针的引物，该引物能够用于不对称PCR方法，制备出本申请的部分长探针。

为了实现上述目的，本申请采用了以下技术方案：

本申请公布了一种转基因成分MLPA检测的探针，该探针包括第一组探针至第十一组探针中的至少一组，每组探针中分别含有长探针和短探针，长探针的5’端具有磷酸化修饰；第一组探针的长探针含有Seq ID No.1所示序列，短探针含有Seq ID No.2所示序列；第二组探针的长探针含有Seq ID No.3所示序列，短探针含有Seq ID No.4所示序列；第三组探针的长探针含有Seq ID No.5所示序列，短探针含有Seq ID No.6所示序列；第四组探针的长探针含有Seq ID No.7所示序列，短探针含有Seq ID No.8所示序列；第五组探针的长探针含有Seq ID No.9所示序列，短探针含有Seq ID No.10所示序列；第六组探针的长探针含有Seq ID No.11所示序列，短探针含有Seq ID No.12所示序列；第七组探针的长探针含有Seq ID No.13所示序列，短探针含有Seq ID No.14所示序列；第八组探针的长探针含有Seq ID No.15所示序列，短探针含有Seq ID No.16所示序列；第九组探针的长探针含有Seq ID No.17所示序列，短探针含有Seq ID No.18所示序列；第十组探针的长探针含有Seq ID No.19所示序列，短探针含有Seq ID No.20所示序列；第十一组探针的长探针含有Seq ID No.21所示序列，短探针含有Seq ID No.22所示序列。需要说明的是，本申请的第一组探针至第十一组探针中每组探针都是针对某个转基因成分设计的，在实际检测中，可以根据实际要求选用其中部分或者全部。

进一步的，本申请的探针中还包括第十二组探针至第十五组探针中的至少一组，同样的，这些探针中每组探针分别含有长探针和短探针，长探针的5’端具有磷酸化修饰；第十二组探针的长探针含有Seq ID No.23所示序列，短探针含有Seq ID No.24所示序列；第十三组探针的长探针含有Seq ID No.25所示序列，短探针含有Seq ID No.26所示序列；第十四组探针的长探针含有Seq ID No.27所示序列，短探针含有Seq ID No.28所示序列；第十五组探针的长探针含有Seq ID No.29所示序列，短探针含有Seq ID No.30所示序列。需要说明的是，第十二组探针至第十五组探针中，每组探针都是针对某个作物的内源基因设计的，在实际检测中，可以根据实际要求选用其中某个或某几个探针与需要检测的靶标转基因成分的探针一起使用。