[发明专利]一种邻苯二酚半乳糖苷的制备方法有效
| 申请号： | 201310255797.5 | 申请日： | 2013-06-25 |
| 公开（公告）号： | CN103276029A | 公开（公告）日： | 2013-09-04 |
| 发明（设计）人： | 卢丽丽;肖敏;郭玉川 | 申请（专利权）人： | 山东大学 |
| 主分类号： | C12P19/44 | 分类号： | C12P19/44 |
| 代理公司： | 济南金迪知识产权代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250100 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 邻苯二酚 半乳糖 制备 方法 | ||
1.一种邻苯二酚半乳糖苷的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用磷酸缓冲液配制乳糖浓度为0.1M～0.3M，邻苯二酚浓度为0.05M～0.2M，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的β-半乳糖苷酶添加量为2μg～10μg/mL的反应体系；
（2）将步骤（1）制得反应体系于37～45℃水浴中反应20～60分钟，煮沸终止反应，10000～12000转/分钟离心20分钟，取上清液；
（3）将步骤（2）制得的上清液，经分离、干燥后，制得邻苯二酚半乳糖苷。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的磷酸缓冲液为浓度10～100mM，pH6～8的磷酸钾缓冲溶液。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中的缓冲液为50mM，pH7.0的磷酸钾缓冲液。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的反应条件为45℃水浴反应45分钟。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中的煮沸终止反应条件为100℃煮沸5分钟。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的分离采用制备型薄层层析板分离。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中的干燥为冷冻干燥。
8.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中还包括分离时的薄层层析检测、合并迁移距离相同的产物的步骤。
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，上述薄层层析检测的步骤如下：
薄层层析板点样后在展层剂中展开，雾喷显色剂后，于120℃烘烤5分钟使糖斑点显色；
上述展层剂由正丁醇、无水乙醇和水按体积比5：3：2混合配制；显色剂是体积百分比为20%的硫酸和浓度为0.5wt%的3,5-二羟基甲苯的溶液。
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