[发明专利]一种合成胸腺法新的方法

权利要求书

1.一种合成胸腺法新的方法，其特征在于，包括以下步骤： 

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在Lys侧链上、Glu侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽树脂1； 

固相合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Glu侧链上、Thr侧链上、Lys侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段1； 

固相合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端偶联有乙酰基、在Ser侧链上、Thr侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2； 

步骤2、将多肽片段1的C段与多肽树脂1的N端进行偶联反应获得多肽树脂2； 

步骤3、脱去多肽树脂2的N端保护基并与多肽片段2的C段进行偶联反应获得多肽树脂3，加入裂解液去除多肽树脂3的树脂以及所有保护基得到胸腺法新粗品； 

步骤4、胸腺法新粗品微滤、RP-HPLC纯化后获得胸腺法新纯品。 

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述固相合成多肽树脂1为： 

步骤A1、Fmoc-β-Asp（OtBu）-OH在偶联体系作用下与氨基树脂进行偶联反应得到Fmoc-β-Asp（OtBu）-氨基树脂； 

步骤A2、脱除Fmoc保护基得到H-β-Asp（OtBu）-氨基树脂，Fmoc-Glu（OtBu）-OH在偶联体系作用下与H-β-Asp（OtBu）-氨基树脂进行偶联反应得到Fmoc-Glu（OtBu）-β-Asp（OtBu）-氨基树脂； 

步骤A3、按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Glu（OtBu）-OH、Fmoc-Glu（OtBu）-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Glu（OtBu）-OH、Fmoc-Lys（Boc）-OH按照步骤A2偶联方式进行氨基酸延伸偶联，最后脱除N端Fmoc保护基得到H-Lys（Boc）-Glu（OtBu）-Val-Val-Glu（OtBu）-Glu（OtBu）-Ala-Glu（OtBu）-β-Asp（OtBu）-氨基树脂，即多肽树脂1； 

其中，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述OtBu、Boc为氨基酸侧链保护基。 

3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述氨基树脂为0.2-1.0mmol/g的Rink amide树脂、Rink amide AM树脂或Rink amide MBHA树脂。 

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述固相合成多肽片段1为： 

步骤B1、Fmoc-Lys（Boc）-OH在DIPEA作用下与2-CTC树脂进行偶联反应得到Fmoc-Lys（Boc）-CTC树脂； 

步骤B2、脱除Fmoc保护基得到H-Lys（Boc）-CTC树脂，Fmoc-Glu（OtBu）-OH在偶联体系作用下与H-Lys（Boc）-CTC树脂进行偶联反应得到Fmoc-Glu（OtBu）-Lys（Boc）-CTC树脂； 

步骤B3、按照SEQ ID NO:2所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将Fmoc-Lys（Boc）-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Asp（OtBu）-OH、Fmoc-Lys（Boc）-OH、Fmoc-Thr（tBu）-OH、Fmoc-Thr（tBu）-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Glu（OtBu）-OH、Fmoc-Ser（tBu）-OH，按照步骤B2偶联方式进行氨基酸延伸偶联，得到Fmoc-Ser（tBu）-Glu（OtBu）-Ile-Thr（tBu）-Thr（tBu）-Lys（Boc）-Asp（OtBu）-Leu-Lys（Boc）-Glu（OtBu）-Lys（Boc）-CTC树脂，加入裂解液去除2-CTC树脂，获得Fmoc-Ser（tBu）-Glu（OtBu）-Ile-Thr（tBu）-Thr（tBu）-Lys（Boc）-Asp（OtBu）-Leu-Lys（Boc）-Glu（OtBu）-Lys（Boc）-OH，即为多肽片段1； 

其中，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述OtBu、tBu、Boc为氨基酸侧链保护基。