[发明专利]一种合成胸腺法新的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成胸腺法新的方法。

背景技术

胸腺法新（Thymosinα1，也称胸腺肽α1）是胸腺素主要的生物活性成分，为体内重要的免疫调节物质，是N端乙酰化的28个氨基酸组成的多肽，其肽序如下：

Ac-Ser-Asp-Ala-Ala-Val-Asp-Thr-Ser-Ser-Glu-Ile-Thr-Thr-Lys-Asp-Leu-Ly s-Glu-Lys-Lys-Glu-Val-Val-Glu-Glu-Ala-Glu-Asn-COOH

本品治疗慢性乙型肝炎和增强免疫系统反应性的作用机制虽尚未完全阐明，但多项体外试验显示，本品通过刺激外周血液淋巴细胞丝裂原来促进T淋巴细胞的成熟，增加抗原或丝裂原激活后T细胞分泌的干扰素α、干扰素γ以及白介素2、白介素3等淋巴因子水平，同时增加T细胞表面淋巴因子受体水平。本品还可通过对CD4细胞的激活，增强异体和自体的人类混合淋巴细胞反应。本品可能增加前NK细胞的聚集，而干扰素可使其细胞毒性增强。体内试验显示，本品可以提高经刀豆蛋白A激活后小鼠淋巴细胞白介素2受体的表达水平，同时提高白介素2的分泌水平。

目前胸腺法新制备工艺有基因工程法（如CN1431311）和固相合成法（如CN102199205），其中基因工程法因工艺繁琐、三废多的不利因素不如固相合成法应用普遍。专利CN102199205公开了一种多肽胸腺法新的合成方法，其采用逐个偶联的合成方式。然而，用逐个偶联法在制备胸腺法新的过程中，合成周期长，杂质较多（在长肽的合成中容易产生缺省肽等杂质），大部分杂质和目的多肽相似导致后续的纯化难以进行，收率和纯度无法达到较高水平。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成胸腺法新的方法，使得本发明所述方法能够提高其纯度和合成重量收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成胸腺法新的方法，包括以下步骤：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列在Lys侧链上、Glu侧链上偶联有保护基且在C端偶联有树脂的多肽树脂1；

固相合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Glu侧链上、Thr侧链上、Lys侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

固相合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端偶联有乙酰基、在Ser侧链上、Thr侧链上、Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

步骤2、将多肽片段1的C段与多肽树脂1的N端进行偶联反应获得多肽树脂2；

步骤3、脱去多肽树脂2的N端保护基并与多肽片段2的C段进行偶联反应获得多肽树脂3，加入裂解液去除多肽树脂3的树脂以及所有保护基得到胸腺法新粗品；

步骤4、胸腺法新粗品微滤、RP-HPLC纯化后获得胸腺法新纯品。

其中，作为优选，步骤2和步骤3所述偶联反应以HOBt/DIC双试剂偶联体系、PyBOP/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系或HBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联。进一步优选地，步骤2所述偶联反应以HBTU/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联，步骤3所述偶联反应以PyBOP/HOBt/DIPEA三试剂偶联体系进行偶联；

步骤2和步骤3所采用的偶联体系各偶联试剂之间的摩尔比优选为：

PyBOP:HOBt:DIPEA为1:1:2，HBTU:HOBt:DIPEA为1:1:2，HOBt:DIC为1:1。

作为优选，步骤3所述裂解液为体积比TFA：苯酚：苯甲硫醚：乙二硫醇：水为80-85:1-5:1-5:1-5:1-5的混合裂解液。

作为优选，步骤2和步骤3所述偶联反应以DCM、NMP、DMF、DMSO中的一种或两种以上为溶剂，其中，作为进一步优选方案，步骤2和步骤3均为体积比DMF：DMSO为1:1的混合溶剂。

作为优选，步骤1所述固相合成多肽树脂1为：

步骤A1、Fmoc-β-Asp（OtBu）-OH在偶联体系作用下与氨基树脂进行偶联反应得到Fmoc-β-Asp（OtBu）-氨基树脂；

步骤A2、脱除Fmoc保护基得到H-β-Asp（OtBu）-氨基树脂，Fmoc-Glu（OtBu）-OH在偶联体系作用下与H-β-Asp（OtBu）-氨基树脂进行偶联反应得到Fmoc-Glu（OtBu）-β-Asp（OtBu）-氨基树脂；