[发明专利]南方松树丛芽诱导及继代培养方法

说明书

技术领域

本发明属植物繁殖技术领域，涉及组织培养育苗技术，尤其是一种南方松树丛芽诱导及继代培养方法。

背景技术

作为一种综合利用价值高、推广前景广阔的树种，松树不仅可用来生产三板、造纸及化纤工业制造，还可用来生产松香、松节油等工业原料。近年来，随着人们日益增长的生活需求与木材资源短缺及石油等不可再生资源逐渐枯竭等间矛盾的激化，生态、经济和社会的可持续发展越来越受到社会关注。基于我国生态安生、资源安全与社会安全等问题，松树作为我国主要的工业用材树种和生物质能源树种，大力发展松树人工林很有必要。

我国自从“六五”国家科技攻关以来，在松树良种选育和速生丰产栽培技术等方面取得了较大突破。其中，乡土马尾松（Pinus massonianan）及引进的湿地松（P.Elliottii）、火炬松（P.taedai）、加勒比松（P.caribaea）、湿加松（P.Elliottii×P.caribaea）等为我国南方的主要造林松属树种。现代林业发展讲究速生丰产、优质高效，欲达到预期目标，最有效的途径是实现优良无性系苗木造林。植物组培技术的使用，是实现松树优良无性系苗木快速繁育的有效途径。

目前，松树组织培养较难，诱导产生的芽不易分化伸长，且增殖系数低、继代周期长，规模化生产的继代芽苗活力偏低、质量较差，进而严重影响到后期单芽生根力。

发明内容

本发明的目的是针对现有松树组织培养较难，诱导丛芽不易分化伸长，增殖系数低，继代周期长，继代芽苗活力偏低、质量较差的技术问题，提供一种适于我国南方松树丛芽诱导及继代培养的方法。

本发明是这样实现的：

一种南方松树丛芽诱导及继代培养方法，包括外植体选择与处理、丛生芽诱导、丛生芽伸长、继代芽培养，获得规模化组织培养南方松树继代芽，其操作步骤如下：

（1）外植体选择与处理

将松树种子消毒后，在无菌条件下进行种子萌发，然后截取带0.5 cm长下胚轴的无菌苗顶芽为外植体进行组织培养；

（2）丛生芽诱导

将无菌外植体接种在诱导培养基中进行丛芽诱导，培养周期：20-26 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：0-16 h，光照强度：0-2000 lx，获得丛生芽；

（3）丛生芽伸长

将诱导出的丛生芽在伸长培养基中进行伸长培养，培养周期：14-28 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：16 h，光照强度：1500-2000 lx，获得丛生伸长芽；

（4）继代芽培养

将单个切下伸长芽的顶芽接种到继代增殖培养基中进行增殖，培养周期：14-21 d，培养温度：24±1℃，光照培养时间：16 h，光照强度：1500-2000 lx，获得继代芽Ⅰ；将继代芽Ⅰ重复步骤（3）进行伸长，单个切下伸长的继代芽Ⅰ并分成顶芽和带侧芽芽段，然后在步骤（4）继代增殖培养基中继续增殖获得继代芽Ⅱ，将继代芽Ⅱ再重复步骤（3）和步骤（4），获得新的增殖继代芽；重复循环步骤（3）和（4），从而实现规模化增殖继代组培南方松树继代芽。

以上所述的继代芽Ⅰ是选用单个切下无水渍样、无玻璃化现象、生长活力旺盛的丛生伸长芽的2 cm长顶芽进行增殖而得。

以上所述的继代芽Ⅱ是选用继代增殖芽继代芽Ⅰ进行伸长至3-5 cm，并分成2 cm长顶芽及1 cm长带侧芽芽段进行继代增殖而得。

以上所述的继代芽培养是重复循环继代芽增殖、丛生芽伸长过程，进行N次培养。

以上所述的诱导培养基为：改良MS培养基+6-BA 2.5-4.0 mg·L^-1+NAA 0.05-0.1 mg·L^-1+蔗糖30000 mg·L^-1+琼脂3500 mg·L^-1+水解酪蛋白500 mg·L^-1，pH值为5.6-6.0。

以上所述的伸长培养基为：改良MS培养基+NAA 0.25-0.4 mg·L^-1或活性炭3000-5000 mg·L^-1+蔗糖30000 mg·L^-1+琼脂3500 mg·L^-1，pH值为5.6-6.0。