[发明专利]一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法及其制剂

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体为一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法及其制剂。

背景技术

半乳糖凝集素(galectins)是动物凝集素的一类，能特异性识别并结合β-半乳糖苷。目前已从动物组织和细胞中分离到15个galectin家族的成员，在细胞核、细胞质、细胞膜、细胞外基质和生物体液中都有发现。半乳糖凝集素-3(galectin-3，Gal-3)是该家族中唯一的嵌合型，参与胚胎发育、细胞黏附、细胞增殖、细胞凋亡和免疫调节等诸多生命活动过程，是一个多功能蛋白。该蛋白由3个主要功能部分构成：(1)12个氨基酸残基组成的N–端结构域(N-terminal)，Ser6磷酸化位点在细胞信号转导中起着重要作用；(2)富含Gly、Tyr、Pro串联重复序列的类胶原结构，是基质金属蛋白酶的底物；(3)约140个氨基酸残基组成高度保守的糖识别结构域(carbohydrate recognition domain,CRD)，其中包含Bcl-2家族中的保守基序Asp-Trp-Gly-Arg (NWGR)，该基序是抑制细胞凋亡的关键结构。在一些肿瘤细胞中，gal-3的过表达与肿瘤侵袭和转移密切相关。另有研究表明仅保留人源Gal-3CRD结构域的重组多肽(Gal-3C末端,Gal-3C)可与内源性Gal-3发生竞争，从而抑制肿瘤的生长与转移。因此，gal-3已成为备受关注的肿瘤诊断和治疗的新靶点，Gal-3C作为潜在的肿瘤抑制剂正在研发中。

发明内容

针对现有技术中存在的上述问题，本发明的目的在于设计提供一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法及其制剂的技术方案，提取方法简单，制得的抗肿瘤生物制剂成本低，效果显著，天然环保、无任何毒副作用。

所述的一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法，其特征在于包括以下步骤：

1）将蛙科动物用清水冲洗干净，将其在﹣7℃-0℃冰浴温度下冬眠处理后处死解剖，分别取皮肤、脑、肺、肾、输卵管、脾、胰部位剪成小块投入液氮中冷冻3-8h，备用；

2）将冷冻后的皮肤、脑、肺、肾、输卵管、脾、胰小块研磨处理30-50mim使细胞破碎释出蛋白质，再超声处理2-5min，再将组织液11000-13000rpm、3-6℃离心4-7min，去除沉淀；

3）将过滤后的上清液加入2-3倍的硫酸铵，不断搅拌使析出沉淀，再次11000-13000rpm、3-6℃离心4-7min，过滤，收集沉淀，将沉淀加等重量的水溶解均匀；

4）最后所得溶液经过透析去除先前所加的硫酸铵，即得半乳糖凝聚素-3液，冰箱冷藏保存。

所述的一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法，其特征在于：所述的蛙科动物为野生棘胸蛙、中华蟾蜍、黑斑蛙、泽蛙、金线蛙、牛蛙、树蛙、虎纹蛙或雨蛙。

所述的一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法，其特征在于步骤2）中：研磨处理时间为30-50mim，超声处理时间为3-4min；离心转速为12000-12500rpm，温度为4-5℃，离心时间5-6min。

所述的一种从蛙科动物中提取半乳糖凝聚素-3的方法，其特征在于步骤3）中：离心转速为12000-12500rpm，温度为4-5℃，离心时间5-6min。

所述的含半乳糖凝聚素-3的抗肿瘤生物制剂，其特征在于：半乳糖凝聚素-3液的重量含量为65-85%，白芨提取物的重量含量为5-15%，蒸馏水的重量含量为10-20%；

所述的白芨提取物采用下述方法制成：将白芨粉碎成500目细粉，再分别加入两倍原料重量的蒸馏水在100-120度温度下蒸煮、搅拌30-45min，再用三层纱布滤除剩余的渣，然后将所得提取液真空浓缩，于150-170℃烘干成白芨提取物。

所述的含半乳糖凝聚素-3的抗肿瘤生物制剂，其特征在于：半乳糖凝聚素-3液的重量含量为70-82%，优选75-80%。

所述的含半乳糖凝聚素-3的抗肿瘤生物制剂，其特征在于：白芨提取物的重量含量为6-12%，优选9-10%。

所述的含半乳糖凝聚素-3的抗肿瘤生物制剂，其特征在于：蒸馏水的重量含量为12-18%，优选14-16%。