[发明专利]卡介菌复合多糖及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种卡介菌复合多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

   （1）将含有卡介菌标准菌株的传代培养物继续接种于苏通培养基进行扩展培养至生长成乳白色至暗橙色菌膜；

   （2）复合多糖粗提：将上述培养物经煮沸提取，离心去沉淀，用极性有机溶剂在2-6℃沉淀复合多糖，获得粗制复合多糖；

   （3）复合多糖精制：将上述粗制复合多糖经阴离子交换柱及超滤处理后，冷冻干燥获得精制复合多糖，即卡介菌复合多糖。

2.根据权利要求1所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，步骤（1）具体包括以下步骤：

 1）制备苏通液体培养基：将天门冬素 4.0g、MgSO₄.7H₂O  0.5g、枸橼酸 2.0g、枸橼酸铁胺 0.05g 、K₂HPO₄ 0.5g、丙三醇 6ml溶于800 ml蒸馏水中，待溶解后加蒸馏水至1000ml，以氨水调PH至7.2，再过滤后分装100 ml锥形瓶，102.9KPa高压灭菌20分钟，待冷后作无菌试验，置4℃冰箱保存；

2）菌种的扩大保存：接种卡介菌标准菌株至制备好的苏通液体培养基，37℃恒温培养箱中静态培养14-28天，待菌生长浓密至生长成乳白色至暗橙色菌膜，置4℃备用；

3）液体培养：接种卡介菌标准菌株至制备好的苏通液体培养基，37℃恒温培养箱中静态培养14-28天，待菌生长浓密后，离心去沉淀。

3.根据权利要求1所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，卡介菌标准菌株的保存与鉴定：卡介菌丹麦株接种用罗氏鸡蛋斜面培养基上培养保存；增菌接种前，先经苏通培养基传代培养；传代培养后，对细菌生长情况进行检定，并经耐酸染色和革兰染色进行形态学鉴定；将鉴定合格的传代培养物继续接种于苏通培养基进行扩增培养4周；由于本菌为表面生长，在苏通液体培养基表面生长成乳白至暗橙色菌膜。

4.根据权利要求1所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，步骤（2）具体步骤为：将卡介菌苏通液体培养基增菌培养物加入25～35倍重量的去离子水，煮沸回流2小时，离心并收集提取液；向培养物中再加水煮沸回流1小时，离心，收集提取液；合并两次提取液，继续煮沸蒸发浓缩至溶液总糖含量达2%，加入2倍体积95%乙醇，离心，收集沉淀，再用95%乙醇清洗沉淀，离心，4℃收集沉淀，晾干，获得粗制复合多糖。

5.一种如权利要求1-4任一所述的卡介菌复合多糖的制备方法制备的卡介菌复合多糖，其特征在于，包括阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖，卡介菌复合多糖的分子量范围为2 000～36 000道尔顿。

6.一种如权利要求5所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，将卡介菌复合多糖制成脂肪注射液、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂、微乳剂和脂肪乳剂中任意一种形式的药物组合物；所述药物组合物含有赋型剂、载体或稀释剂。

7.根据权利要求6所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，所述药物组合物的给药途径为口服、含服、腔道灌注、经皮、静脉和肌肉注射中任意一种。

8.根据权利要求6所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，所述卡介菌复合多糖的药物组合物单独使用；或者结合抗肿瘤药物使用。

9.根据权利要求8所述的卡介菌复合多糖的用途，其特征在于，所述的抗肿瘤药物包括环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、氟铁龙、安曲希、丝裂霉素、阿霉素、表阿霉素、正定霉素、长春新碱、喜树碱、顺铂、乐沙定、辛乐尔和紫杉醇。