[发明专利]一种用于检测氧化应激标志物d-ROMs的体外检测方法

权利要求书

1.一种操作简单、成本低廉、成功率高的检测ROMs的方法，其特征在于，该方法包括：

1)全血离心，分离血清和血细胞；

2)取适量步骤1)中血清，加入Tris酸缓冲液配制的适宜浓度的芳香胺(DMPD，N，N-二甲基对苯二胺二盐酸盐)溶液；

3)血清中二价铁及三价铁在酸缓冲液中从血清蛋白中释放，过氧化氢物(ROOH)与二价铁及三价铁反应，生成烷氧自由基(RO^*)和过氧化自由基(ROO^*)；

4)步骤3)中生成的烷氧自由基(RO^*)和过氧化自由基(ROO^*)将芳香胺氧化，生成粉红色产物；

5)粉红色产物用波长为505nm的自动生化分析仪读数，颜色强度与读取OD值(ROMs浓度)呈比例。

6)在以上步骤进行的同时，步骤1)中血清以不同浓度的H₂O₂代替，余步骤不变，以不同浓度H₂O₂反应产物读取的OD值做标准曲线，由此计算出血清中过氧化氢物(ROOH)相当于H₂O₂的浓度。

2.如权利要求1所述检测ROMs的方法，其特征在于，步骤2)中所述酸缓冲液为：浓度为100mM的Tris-Cl(PH值为2)。

3.如权利要求1所述检测ROMs的方法，其特征在于，步骤2)中所述芳香胺为：100mM的Tris-Cl酸缓冲液配制的浓度为5mM的DMPD。

4.如权利要求1所述检测ROMs的方法，其特征在于，步骤6)中所用已知浓度的H₂O₂代替血清，测定的OD值可做标准曲线，用以计算血清中过氧化氢物(ROOH)相当于H₂O₂的浓度。

5.一种如权利要求1所述通过检测血液中总的活性氧代谢物(ROMs)含量从而评价人体内整体氧化应激水平的应用。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，针对ROMs的氧化应激分析可作为治疗方案制定或预后判断等的依据，具有相当重要的临床意义。