[发明专利]一种快速高效吸附汞离子的载体及其细菌表面展示工程菌和应用

权利要求书

1.一种能够吸附汞离子的载体，其特征在于：以含有自转运蛋白的分泌序列的载体pBAT作为一种表面展示工具，奇异变形杆菌的谷胱甘肽转移酶连接到ScaI内切酶处理过的pBAT载体中，即得到吸附汞离子的载体（质粒载体pBATGst）。

2.一种快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌，其特征在于：采用细菌表面展示的方式，通过信号传递系统，含有自转运蛋白的分泌序列的载体pBAT将谷胱甘肽转移酶（GST）锚定在宿主菌表面，即得到吸附汞离子细菌表面的工程菌（Top10/pBATGst）。

3.按权利要求2所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的构建方法，其特征在于：

1）质粒载体pBATGst的构建：

a.将质粒pBAT用限制性内切酶ScaI处理，用去磷酸化酶去掉酶切位点暴露的磷酸基团；

b.采用奇异变形杆菌作为模板，以引物GSF3和GSR3进行PCR扩增，扩增产物纯化，而后与ScaI处理过的pBAT载体在室温条件下连接2小时，即得到质粒载体pBATGst；

2）Top10/pBATGst工程菌的构建

将上述所得连接处理混合液质粒载体pBATGst转化大肠杆菌Top10，并在在含有100μg/ml氨苄青霉素（ampicillin，Ap）的LB固体培养基上培养筛选含有目的插入片段的重组转化子，即为Top10/pBATGst。

4.按权利要求3所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的构建方法，其特征在于：

所述引物GSF3和GSR3分别为GSF3:（5’-ATGATCGATCTTTATTATGCAAACAC-3’）和GSR3:（5’-ACCAAACAGTTTTTTGGCTGC-3’）。

5.按权利要求3所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的构建方法，其特征在于：所述PCR条件：94℃60s,然后94℃40s,57℃60s,72℃60s,30个循环后再72℃延伸反应10min；

PCR体系为50μl，其中包括H20，37.5μl；10×PCR缓冲液，5μl；dNTP，4μl；GSF3:1μl；GSR3:1μl；Template，1μl；酶，0.5μl；酶为能PCR出平末端DNA产物的pfu酶。

6.一种权利要求2所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：所述工程菌可用于吸附环境中的汞离子。

7.按权利要求6所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：所述工程菌可用于吸附水环境中的汞离子。

8.按权利要求6或7所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：所述工程菌吸附的汞离子，经pH的调节后可将汞离子解吸附后回收再利用。

9.按权利要求8所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：将所述吸附了汞离子的工程菌重悬于不同pH（pH为3-11）的BR（Britton-Robison）缓冲液中，室温晃动混匀后离心，取上清即为回收的汞离子。

10.按权利要求9所述的快速高效吸附汞离子的细菌表面展示工程菌的应用，其特征在于：将所述吸附了汞离子的工程菌重悬于pH为3-11的BR（Britton-Robison）缓冲液中，室温晃动1-5小时混匀后离心，取上清即为回收的汞离子。