[发明专利]仿刺参检测引物、试剂盒及实时荧光PCR检测方法

权利要求书

1.一种仿刺参检测引物，其特征在于：至少包括下述扩增引物组中的一组：SEQ ID NO.1～3、SEQ ID NO.4～6、SEQ ID NO.7～9。

2.根据权利要求1所述的仿刺参检测引物，其特征在于：还包括下述扩增引物组中的至少一组：SEQ ID NO.10～11、SEQ ID NO.12～13。

3.一种仿刺参检测试剂盒，其特征在于：至少包括下述扩增引物组中的一组：SEQ ID NO.1～3、SEQ ID NO.4～6、SEQ ID NO.7～9。

4.根据权利要求3所述的仿刺参检测试剂盒，其特征在于：还包括下述扩增引物组中的至少一组：SEQ ID NO.10～11、SEQ ID NO.12～13。

5.一种仿刺参检测方法，其特征在于：对样品DNA进行Taqman探针法检测，步骤包括：

①反应体系为25μL，其中：

所述引物对为SEQ ID NO.1～3，SEQ ID NO.4～6或SEQ ID NO.7～9中的一组；

②反应参数：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火/延伸34s，40个循环。

6.如权利要求5所述的仿刺参检测方法，其特征在于，还包括对样品DNA进行SYBR Green I嵌合荧光法检测，步骤包括：

①反应体系为25μL，其中：

2倍浓度的Premix Ex Taq^TMII 12.5μL

浓度为10μmol/L的引物对         各1μL

灭菌双蒸水                     8.5μL

待检样品的DNA模板              2μL

所述引物对为SEQ ID NO.10～11或SEQ ID NO.12～13中的一组；

②反应参数：95℃预变性30s；95℃变性5s，60℃退火/延伸34s，40个循环。

7.根据权利要求5或6所述的仿刺参的检测方法，其特征在于：样品DNA的制备方法包括以下操作步骤：取50mg样品海参体壁，剪碎后放入装有0.5ml DNA Isolation Reagent for Meat and Meat Products试剂的离心管中；将离心管置于水浴锅中70℃加热10分钟，每隔2-3分钟用手轻弹混匀；加热结束后立即将离心管置于离心机中，于4℃条件下12000rpm离心10分钟；从离心后的离心管中吸取250μl含DNA的水层作为待检样品的DNA模板。

8.如权利要求5～7中任一项所述的仿刺参的检测方法在检测仿刺参成分中的应用。