[发明专利]一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法有效

专利信息
申请号: 201310276185.4 申请日: 2013-07-03
公开(公告)号: CN104280366B 公开(公告)日: 2017-10-10
发明(设计)人: 鲁伯埙;胡朝阳 申请(专利权)人: 复旦大学
主分类号: G01N21/64 分类号: G01N21/64
代理公司: 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 代理人: 吴桂琴
地址: 200433 *** 国省代码: 上海;31
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摘要:
搜索关键词: 一种 通量 检测 化合物 靶标 蛋白 方法
【权利要求书】:

1.一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法,其特征在于,其包括将待测化合物标记后,与人类全基因组表达的蛋白文库进行亲和力检测,按下述步骤:

(1)构建携带荧光标签的蛋白文库,运用构建的人类全基因库,为每组基因增加荧光标签,构建全基因组的基因过表达质粒,形成蛋白文库,所述的荧光标签是HA-lag;

(2)为待检测化合物增添可识别的标签;

(3)将构建的步骤(2)待测化合物与步骤(1)的蛋白文库进行共孵育,使所述的化合物与文库蛋白充分的结合;

(4)利用均相时间分辨荧光共振原理(HTRF)检测加标签化合物和文库蛋白的结合能力。

2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)中,根据待测试化合物的溶解性、极性和其他物理性质,选择与其匹配的标志物,根据标志物的特点选择孵育条件,获得携带可被识别标签的化合物。

3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:选择与待测试化合物匹配的标志物是生物素。

4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中将构建的待测化合物与蛋白文库进行共孵育,使二者得到充分的结合,为后续的荧光共振能量转移提供反应条件。

5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中通过荧光共振能量转移的发生,对荧光强度进行筛选后,得到待测化合物结合的靶标蛋白。

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