[发明专利]一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法有效
申请号: | 201310276185.4 | 申请日: | 2013-07-03 |
公开(公告)号: | CN104280366B | 公开(公告)日: | 2017-10-10 |
发明(设计)人: | 鲁伯埙;胡朝阳 | 申请(专利权)人: | 复旦大学 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64 |
代理公司: | 上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙)31268 | 代理人: | 吴桂琴 |
地址: | 200433 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 通量 检测 化合物 靶标 蛋白 方法 | ||
1.一种高通量检测化合物的靶标蛋白的方法,其特征在于,其包括将待测化合物标记后,与人类全基因组表达的蛋白文库进行亲和力检测,按下述步骤:
(1)构建携带荧光标签的蛋白文库,运用构建的人类全基因库,为每组基因增加荧光标签,构建全基因组的基因过表达质粒,形成蛋白文库,所述的荧光标签是HA-lag;
(2)为待检测化合物增添可识别的标签;
(3)将构建的步骤(2)待测化合物与步骤(1)的蛋白文库进行共孵育,使所述的化合物与文库蛋白充分的结合;
(4)利用均相时间分辨荧光共振原理(HTRF)检测加标签化合物和文库蛋白的结合能力。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述步骤(2)中,根据待测试化合物的溶解性、极性和其他物理性质,选择与其匹配的标志物,根据标志物的特点选择孵育条件,获得携带可被识别标签的化合物。
3.根据权利要求2所述的方法,其特征在于:选择与待测试化合物匹配的标志物是生物素。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中将构建的待测化合物与蛋白文库进行共孵育,使二者得到充分的结合,为后续的荧光共振能量转移提供反应条件。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(4)中通过荧光共振能量转移的发生,对荧光强度进行筛选后,得到待测化合物结合的靶标蛋白。
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