[发明专利]一种樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法

权利要求书

1.一种樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法，其特征在于，以樱桃茎段为外植体建立无菌系，从而进行离体快速繁殖，具体包括以下步骤：

1)接种材料的预处理：于11月中下旬，选择生长健壮、无病虫害的樱桃枝条，摘去自然落叶后残留的叶片，用透明硫酸纸套住枝条顶端20cm～30cm，基部用回形针固定；

2)外植体的准备与消毒：翌年6月，选取预处理的半木质化嫩枝，剪去叶片，用洗洁精清洗后，用流水冲洗2～4h，在超净工作台上先用75%v/v的乙醇溶液浸泡消毒，然后用10%v/v的次氯酸钠溶液浸泡消毒，再用无菌水冲洗；

3)无菌系的建立：用无菌吸水纸吸干外植体表面的水份，将嫩枝切成1～2cm长的茎段，每个茎段带1～2个茎节，切除切口处因消毒而坏死的组织，将外植体培养于初始培养基；其中前期进行培养架上自然培养，2周后进行光照培养；

4)芽的增殖培养：将上一步得到的无菌系新芽分割后，接种于增殖培养基进行增殖培养；在后续的继代增殖培养过程中，将丛芽基部分割后培养于新鲜的增殖培养基继续进行增殖培养，对于较长的新芽可以切割分段后培养；

5)壮苗与生根培养：将增殖的丛生芽离基部0.6～1.2cm处切成单芽，接种于生根培养基进行诱导生根培养，培养得樱桃生根试管苗；

6)试管苗移栽：将生根试管苗带瓶盖在常温下炼苗3～5d，打开瓶盖继续炼苗2～3d，轻轻取出试管苗，去除其基部培养基后移栽，移栽后浇足水，并保持温度24℃±2℃，空气湿度70～80%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的初始培养基配方为：改良的MS培养基+1～2mg/L ZT+0.5～1.0mg/L BA+0.1～0.2mg/L NAA+0.5～1.5水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH=5.6-5.8。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中，所述的培养架上自然培养是指将培养物置于培养室的培养架上，但不开灯，光照强度为300勒克斯；所述光照培养，其光照为12h/d，光照强度为3000lx；培养室温度为24℃±2℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中，所述的增殖培养基配方为：改良的MS培养基+0.5～1mg/L BA+0.1～0.5mg/L KT+0.1～0.2mg/L NAA+0.001～0.1mg/L TDZ+0.5～1.5g/L水解酪蛋白+蔗糖30g/L+琼脂粉5.5～6.5g/L，pH=5.6-5.8。

5.根据权利要求2或4所述的方法，其特征在于，所述改良的MS培养基是指硝酸铵减半调整为825mg/L，其他成分不变，并添加硝酸钙278mg/L的MS培养基。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中，所述的生根培养基配方为：大量元素减半、微量元素不变的MS培养基+1～2mg/L IBA+0.2～0.5mg/L NAA+0.5～1.0g/L水解酪蛋白+蔗糖20g/L+琼脂粉5.5～6.5 g/L，pH=5.6-5.8。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)、5)进行光照培养，光照为12h/d，光照强度为3000lx的条件下培养，培养室温度为24℃±2℃。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中，将增殖的丛生芽切成单芽时，保持每个单芽有3～5片叶，切割处离单芽最下面1张叶的基部2mm±1mm。

9.根据权利要求1所述的的方法，其特征在于，步骤6)中，移栽基质为体积比为1:1:1的泥炭、椰慷和珍珠岩。