[发明专利]一种樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法

说明书

技术领域

本发明属植物组织培养技术领域，具体涉及一种樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法。

背景技术

樱属（Cerasus）植物有120多个种，多数分布在欧洲和亚洲。世界上栽培较多的种有中国樱桃（Prunus pseudoerasus Lindl.）、欧洲甜樱桃（Prunus avium L.）、欧洲酸樱桃（Prunus cerasus L.）和毛樱桃（Prunus tomentosa Thub.）四个种。樱桃具有树体矮化开张、结果早、丰产、抗病性强、适应性广等优良特性，其果实是一种高档水果，营养丰富，甜酸可口，经济价值高。樱桃传统的繁殖方法是根蘖、压条或扦插繁殖，速度慢、幼苗生长不一致，不能满足大面积栽培推广优良品种的需要且常规繁殖方法的种苗在栽培过程中易患根癌病，致使树体衰落及黄化死亡，这是樱桃的致命病害，同样也是我国樱桃矮化密植栽培发展的制约因素。利用组织培养技术进行快速繁殖，生产优质种苗，具有繁殖速度快、稳定性高及消除根癌病等特点，是解决其规模化栽培种苗问题的有效方法。

现有技术有许多关于樱桃组织培养的相关报道，例如，王瑞等以大樱桃矮化砧木吉塞拉6号为实验材料，研究了不同生长调节剂配比对大樱桃茎芽再生形成不定芽的诱导效应。结果表明：(1)大樱桃不定芽的再生存在腋芽再生与基部丛芽再生两种基本方式；(2)当培养基中生长调节剂组配为6-BA(1mg/L)+KT(0.5mg/L)+IBA(0.2mg/L)时，大樱桃茎芽外植体的分化水平达到最高；(3)MS+6-BA(1mg/L)+KT(1mg/L)+IBA(0.3mg/L)是大樱桃不定芽高频再生的最佳培养条件【王瑞等，大樱桃“吉塞拉”试管苗优化培养基的筛选，陕西农业科学，2012(3):37-45】。魏明杰等以甜樱桃品种高砂、顽童和中国樱桃品种莱阳矮樱为材料开展了组培快繁技术研究。结果表明，高砂、顽童和莱阳矮樱3个樱桃品种茎尖组培苗在F14培养基上的增殖系数比MS高，前一处理的增殖系数分别是4.17、3.78和5.0，后一处理分别是3.33、3.22和4.17；以F14+6-BA1.0mg/L+IBA0.5mg/L+GA2.0mg/L对高砂和顽童的茎尖组培苗增殖系数大，以F14+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L+GA2.0mg/L对高砂组培苗的增殖系数大，促进节间伸长的效果好；在培养基F14+IBA1.0mg/L上，平均生根率高砂较顽童高；在F14+IBA1.0mg/L上添加活性炭500～1000mg/L时，可有效提高顽童的生根率【魏明杰等，樱桃组培快繁技术研究，落叶果树2012，44(2):09-13】。袁小环等开展了甜樱桃组培苗的生根研究，结果表明：1/2F14为最适基本培养基；液体培养对组培苗的生根有很大的促进作用，根部黑暗条件培养次之,生长素质量浓度配比以IBA1.0mg/L+NAA1.0mg/L效果最好，生根率可达89.7%【袁小环等，甜樱桃组培苗的生根研究，西北农林科技大学学报(自然科学版)，2004，32(4):71-78】。

俗话说，樱桃好吃，树难载。尽管樱桃的组织培养研究已取得了一定的进展，但还存在着初始培养中培养物容易污染，繁殖系数低，生根困难，移栽存活率低等问题，严重限制了樱桃的规模化繁殖和栽培。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法，这种方法具有污染率低、繁殖系数高、种苗质量好、移栽成活率高的特点。采用该方法繁育樱桃幼苗，繁殖系数可达5.8，繁殖的幼苗茎叶粗壮、根系发达，移栽存活率达98%。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案来实现。

所述的樱桃幼苗的组织培养规模化繁殖方法，以樱桃茎段为外植体建立无菌系，从而进行离体快速繁殖，具体包括如下步骤：

1)接种材料的预处理：于11月中下旬，选择生长健壮、无病虫害的樱桃枝条，摘去自然落叶后残留的叶片，用透明硫酸纸套住枝条顶端20cm～30cm，基部用回形针固定。

2)外植体的准备与消毒：翌年6月，选取新抽生的半木质化的嫩枝，剪去叶片，用洗洁精清洗后，用流水冲洗2～4h，在超净工作台上先用75%v/v的乙醇溶液浸泡消毒，然后用10%v/v的次氯酸钠溶液浸泡消毒，再用无菌水冲洗。