[发明专利]一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法

说明书

技术领域

本发明属于ACE抑制肽制备领域，尤其涉及一种杜仲籽粕蛋白酶解制备ACE抑制肽的方法。

背景技术

杜仲(EucomMol/Lia Ulmoides Oliv)是我国特有的名贵中药材和经济树种，主要分布在湖南、湖北、陕西、四川、重庆、贵州等西部省市，武陵山区建有规模化的杜仲商品生产基地，仅湖南西部地区就有杜仲40万亩，成片20余万亩，开发应用前景十分广阔。长期以来，对杜仲的利用仅仅限于杜仲皮，杜仲果实为翅果，扁平，蛋白质含量约15％，含有18种氨基酸，其中人体必需氨基酸齐全且占总氨基酸含量的32.3％，谷氨酸含量最高。

心脑血管疾病已成为危害人类健康的头号杀手，而高血压是最常见的心血管疾病之一。中国是高血压病高发的国家之一，2012年我国成人高血压患病率为18.6％，患者数量达1.6亿，且每年近100万患者因此病而死亡。高血压成为继肿瘤之后的第二个威胁人类健康的慢性疾病，如何预防和治疗高血压己成为全社会共同关注的焦点。

目前，对于高血压病多是采用合成的ACE抑制剂作为主要的治疗药物，但存在副作用明显、长期服药导致依赖性等不安全因素。因此，寻找安全性高、降血压效果好的ACE抑制剂已成为国内外研究者所关注的重要课题。

食物蛋白质是人体新陈代谢过程中极为重要的营养物质，具有提供构成机体所需氨基酸和能量供应等功能。有关研究表明，以数个氨基酸结合而成的功能肽具有比游离氨基酸更好的消化吸收性能；功能肽还有原蛋白质或其组成氨基酸所没有的广泛的生理调节功能，如促进钙吸收、降血压、降低胆固醇、免疫调节等，特别是具有降血压活性的ACE抑制肽成为生物活性肽研究领域的热点之一。

血管紧张素转化酶(Angioensin Converting Enzyme，ACE，EC3.4.15.1)是一种含锌的二肽羧酶，能被氯离子激活并具有较宽的底物特异性。ACE广泛分布于哺乳动物的组织中，尤其在血管内皮细胞、上皮吸收细胞、神经上皮细胞及雄性生殖细胞中，ACE以膜结合的胞外酶形式存在。在肾素-血管紧张素系统(RAS)和激肽释放酶-激肽系统(KKS)中，ACE对机体血压和心血管功能起着重要的调节作用。在RAS中，ACE处于核心地位，起限速酶的作用。ACE催化不具有活性的血管紧张素I(十肽)转化为具有强烈收缩血管作用的血管紧张素II(八肽)，同时，血管紧张素II也能刺激促进醛固酮的分泌进而促进肾脏对水、Na⁺、K⁺的重吸收，引起钠贮量和血容量的增加，使血压升高。在KKS中，ACE能催化舒缓激肽的降解。另外，ACE还能催化与心血管系统具有相互作用的神经肽、脑啡肽等的降解。因此，抑制ACE活性被认为是治疗高血压重要而有效的方法，在研发治疗高血压药物过程中，ACE的抑制成为重要的靶标。目前，高效、特异的ACE抑制剂在治疗高血压病和充血性心力衰竭中发挥着重要作用。

酶解法是目前制备ACE抑制肽应用最多的方法，其原理是植物性或动物性原料经预处理后得到含量较高的蛋白质，然后加入特异性蛋白酶水解一定时间，分离获得具ACE抑制活性的多肽产物。Yun HG和Kim SK(2001)以鳍鱼皮为原料提取鱼皮凝胶，然后以碱性蛋白酶、链霉蛋白酶、胶原酶顺序进行分步水解，纯化获得两种三肽GPL和GPM。Qian zJ(2007)分别使用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、a-胰凝乳蛋白酶、胰蛋白酶水解牛蛙肌肉蛋白，其中碱性蛋白酶水解物显示最高的ACE抑制活性，对其纯化后获得ACE抑制活性较高的十二肽(GAAELPCSADWW)。王毅梅(2011)以草鱼肉为原料，通过碱性蛋白酶水解制备ACE抑制三肽(LPM)，IC₅₀值达0.00534mg/mL。

自发现食源性ACE抑制肽以来，因其安全性高、无副作用、人体吸收快等优点而备受科研工作者关注。随着对其制备方法、作用机理等研究的深入，ACE抑制肽在开发降血压功能的保健食品中具有极大的应用前景，日本己经进行ACE抑制肽的规模化生产。然而，我国目前对于食源性ACE抑制肽的研究仍处于起步阶段，对于原料的来源、制备工艺、产品精制、实验室成果产业化等方面仍然存在较多的问题。