[发明专利]EGFR基因19号外显子19种缺失突变检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种EGFR基因19号外显子19种缺失突变检测试剂盒，包括分开设置的第一试剂和第二试剂，其中所述第一试剂包含引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，探针SEQ ID NO:3，所述第二试剂包含引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，探针SEQ ID NO:3和阻断核酸序列SEQ ID NO:4，其中所述探针SEQ ID NO:3的5’端连接有荧光基团，3’端连接有淬灭基团。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述荧光基团可以为FAM、VIC、ROX或HEX。

3.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂和第二试剂中所述引物对SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，所述探针SEQ ID NO:3组成及含量均相同。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂和第二试剂分别包含PCR缓冲液以及Taq酶。

5.一种EGFR基因19号外显子突变检测方法，所述检测方法包括以下步骤：

（1）获得待测样品基因组DNA；

（2）取权利要求1-4中任一项所述的检测试剂盒，将所述基因组DNA先后取相同的量加入所述第一试剂和所述第二试剂中并同时进行PCR反应，根据两个PCR反应体系分别得到的Ct值的差值△Ct判断是否具有相应的基因突变。

6.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，根据以下条件进行所述判断：

△Ct<6则待测样品存在19号外显子缺失突变；△Ct值≥6则待测样品无19号外显子缺失突变或缺失突变丰度低于本试剂盒突变检测下限。

7.如权利要求5所述的检测方法，其特征在于，还包括对上样量是否合适进行判断的步骤，判断依据如下：

Ct₀≤32则上样量合适，检测结果有效；Ct₀>32则上样量偏低，需增加上样量后重新检测，

其中，所述Ct₀为所述第一试剂对应的Ct值。

8.如权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述△Ct值≥6的情况包括所述第二试剂进行PCR反应后无Ct值的情况。

9.如权利要求5-8中任一项所述的检测方法，其特征在于，所述步骤（2）中PCR反应条件为：

95℃ 5～10min；

95℃ 15～30s，60℃ 45～60s，40～45个循环。